Анализ крови на сифилис

Диагностика сифилиса с применением трепонемных тестов

При проведении трепонемных тестов используются антигены трепонемного происхождения. Их отрицательной стороной является невозможность использования для контроля эффективности проводимого лечения, получение положительных результатов при спирохетозах и невенерических трепонематозах и получение ложноположительных результатов при онкологических заболеваниях, лепре, некоторой эндокринной патологии. Такие тесты, как РПГА, ИФА и РИФ остаются положительными многие годы после излечения сифилиса, а в некоторых случаях и пожизненно.

РИБТ и РИФ являются более специфическими из всех серологических реакций, применяемых для диагностики сифилиса. Они позволяют различать ложноположительные реакции, выявлять поздние формы сифилиса, протекающие с отрицательными реакциями. При помощи РИБТ распознаются ложноположительные реакции у беременных, когда необходимо решить вопрос об инфицированности ребенка.

Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ, РИТ)

Суть реакции заключается в том, что антитела, находящиеся в сыворотке крови больного, обездвиживают бледные трепонемы. Отрицательной считается реакция при иммобилизации до 20% возбудителей, слабоположительная — 21 — 50%, положительная — 50 — 100%. РИБТ иногда дает ложноположительные результаты. Тест сложный и трудоемкий, однако, является незаменимым при проведении дифференциальной диагностики скрытых форм заболевания и ложноположительных результатов серологических реакций, в том числе у беременных. РИБТ дает 100% положительный результат при вторичном, раннем и позднем сифилисе, в 94 — 100% случаев — при других формах сифилиса.

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

Суть реакции заключается в том, что бледные трепонемы (антигены), соединенные с антителами, меченными флюорохромами, издают в люминесцентном микроскопе желто-зеленое свечение. Результат оценивается знаком (+). С помощью РИФ выявляются иммуноглобулины класса А.  Реакция иммунофлюоресценции становится положительной раньше, чем реакция Вассермана. Она всегда положительная при вторичном и латентном сифилисе, в 95 — 100% случаев положительная при третичном и врожденном сифилисе. Техника проведения данного вида исследования проще, чем у РИБТ, но заменить РИФ на РИБТ невозможно, так данная реакция уступает РИБТ по специфичности. РИФ-10 (модификация РИФ) более чувствительна, РИФ-200 и РИФ-абс более специфичны.

Рис. 9. Анализ крови на сифилис — реакция иммунофлюоресценции (РИФ).

Реакция иммунного прилипания бледных трепонем (РИПБТ)

Суть реакции заключается в том, что сенсибилизированные сывороткой больного бледные трепонемы в присутствии комплемента прилипают к поверхности эритроцитов. Полученные комплексы при цетрофугировании выпадают в осадок. Чувствительность данного теста и специфичность близки к РИФ и РИБТ.

Иммуноферментный анализ на сифилис (ИФА)

С помощью ИФА определяются иммуноглобулины класса М и G. Методика IgM – ИФА может быть использована в качестве скринингового и подтверждающего теста. Чувствительность ИФА и его специфичность аналогичны РИФ. При сифилисе ИФА дает положительные результаты с третьего месяца инфицирования и довольно долго (иногда всю жизнь) остается положительным.

Рис. 10. Иммуноферментный анализатор.

Реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации (РПГА)

РПГА основана на способности эритроцитов, на которых адсорбированы антигены бледной трепонемы, в присутствии сыворотки больного склеиваться (гемагглютинация). РПГА применяется для диагностики всех форм сифилиса, в том числе скрытого. При применении высокого качества антигена данный вид серологической реакции превышает все остальные тесты по специфичности и чувствительности.

Рис. 11. РПГА применяется для диагностики всех форм сифилиса.

Рис. 12. Анализ на сифилис — реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации (схема).

Рис. 13. Вид перевернутого зонтика, занимающего все дно пробирки, свидетельствует о положительной реакции. В случае, когда эритроциты оседают столбиком («пуговка») в центре дна пробирки говорят об отрицательной реакции.

Рис. 14. Тест РПГА в лабораторных условиях.

Подробно об анализе крови на RW

О заболеваниях сифилисом рассказывают многие исторические хроники с XV–XVΙ веков. Его широкое распространение в те времена послужили причиной огромного количества смертей – по некоторым источникам насчитывалось до 5 млн. Причем не только в Азии, но и в Европе было отмечено повальное вымирание жителей вследствие заражения сифилисом. Тогда микроорганизма, вызывающего заболевание – бактерию бледную трепонему, не умели не диагностировать, ни уничтожать, поэтому патология считалась смертельной.

История создания анализа крови на RW началась еще в начале прошлого столетия. Методика проведения данной диагностики была разработана немецким микробиологом Августом фон Вассерманом в 1906 году, но, к примеру, в России стала обязательной для многих категорий людей лишь только с 1928 года. Исследование получило название в честь своего создателя, и расшифровка аббревиатуры RW (РВ) звучит как «реакция Вассермана».

Данная диагностика является серологическим анализом, способным не только обнаружить присутствие микроорганизма в теле человека, но и установить сроки, когда он появился и дал толчок возникновению заболевания. Принцип проведения таких исследований заключается в поиске образующихся антител (иммуноглобулинов) к бледной трепонеме, что и есть основной лабораторный признак патологии.

Реакция Вассермана

Тест для диагностики сифилиса был назван по имени немецкого иммунолога, создавшего его в 1906 году. Исследование позволяет выявить начальные стадии болезни — первичный и вторичный сифилис, и еще недавно было обязательно для всех категорий населения.

Классический тест не отличается высокой достоверностью, и с 2006 года в России отменен.

Вместо RW-анализа крови получила распространение группа реакций связывания комплемента, в том числе МП-тест или микрореакция преципитации.

В ряде лабораторий продолжают использовать РВ реакцию при диагностике скрытого и вторичного сифилиса, а под названием «RW-анализнередко подразумевают метод микропреципитации.

Когда назначают анализ на РВ

Кровь на РВ исследуют:

• при прохождении профессионального осмотра для устройства на работу;
• при сдаче крови или спермы донорами;
• во время беременности.

При беременности анализ крови на RW сдают 3 раза, и объясняется такое внимание, тем, что это исследование позволяет предотвратить у плода развитие врожденного сифилиса. Бледная трепонема передается через плаценту от зараженной матери и поражает все органы плода

Внутриутробное заражение чаще всего заканчивается гибелью малыша на 7 месяце беременности

Бледная трепонема передается через плаценту от зараженной матери и поражает все органы плода. Внутриутробное заражение чаще всего заканчивается гибелью малыша на 7 месяце беременности.

Чтобы снизить все возможные риски для развития плода, анализ крови на RW беременные женщины сдают:

• при постановке на учет;
• на 30 неделе;
• перед родами.

Показанием для сдачи крови на реакцию Вассермана служат:

• наркомания;
• бытовой контакт с лицами, инфицированными бледной трепонемой;
• случайный незащищенный половой контакт;
• срочная госпитализация с признаками инфицирования трепонемой;
• заключение в тюрьме;
• увеличение лимфатических узлов неясного характера с высокой температурой.

Сегодня анализ крови на RW заменили более точные способы диагностики. Реакция Вассермана показывает большое число ложноположительных результатов, не всегда определяет присутствие возбудителя инфекции на третьей стадии сифилиса.

Суть метода

Для проведения классического исследования требуются:

• образец венозной крови больного – всего отбирается 8 – 10 мг из локтевой вены;
• кардиолипин – фосфолипид, полученный из клеточных митохондрий сердца быка.

Фосфолипид кардиолипин входит в состав внутренних мембран митохондрий различных видов животных. Есть это соединение и в клетках бледной трепонемы Treponema pallidum.

Когда трепонема попадает в кровь, фосфолипид выступает антигеном, к которому иммунитет человека вырабатывает антитела.

В образце крови зараженного человека присутствуют антитела к кардиолипину. Чтобы это выявить, для проведения RV анализа берут кардиолипин, что был заранее приготовлен из сердца быка, и помещают в пробирку с образцом крови больного.

Если в крови присутствуют антитела к фосфолипиду, то они взаимодействуют, а реакция считается положительной.

Степень взаимодействия отражает количество антител, присутствующих в образце и уровень поражения сифилисом.

При отсутствии взаимодействия антител крови с кардиолипином RW-тест считается отрицательным.

Кардиолипин не является специфическим антигеном по отношению к трепономам. Кроме взаимодействия с антителами к трепономам, данный фосфолипид способен взаимодействовать с антителами, которые вырабатываются к целому ряду инфекционных заболеваний.

Подготовка к анализу на РВ

Анализ проводят натощак в утреннее время. Для проведения классического РВ-исследования требуется образец венозной крови.

К анализу на РВ следует подготовиться, это поможет избежать ложноположительных результатов, что отмечается, если принимать пищу ранее, чем за 6 часов до сдачи крови на RW.

Нельзя за сутки перед исследованием крови употреблять жирную, жареную пищу или спиртосодержащие напитки.

Прием лекарственных препаратов, например, наперстянки, введение сывороток также способны исказить результаты исследования.

Женщинам во время менструации следует воздержаться от проведения теста, так как в этот период возможно искажение реакции. Нельзя проводить анализ при повышенной температуре, инфекционном заболевании.

Когда будет готов анализ

Узнать, присутствуют ли в крови антитела к кардиолипину, можно уже спустя 2 суток после проведения теста на реакцию Вассермана. Информацию о степени заражения и количества возбудителя болезни можно узнать спустя неделю после сдачи крови.

Доверить расшифровку теста на РВ лучше всего врачу, и не пытаться самостоятельно интерпретировать полученные данные, чтобы не пугаться напрасно в случае ложноположительного ответа из лаборатории.

Описание методики

Что представляет собой RW-анализ? Дело в том, что столкнувшись с подобным «врагом», организм начинает вырабатывать антитела, которые обезоруживают трепонему за счет реакции связывания комплемента (РСК). Эти антитела, образующие устойчивое соединение с возбудителем сифилиса, постоянно присутствуют в крови и спинномозговой жидкости зараженного человека, однако обнаружить их не так-то просто. Здесь и приходит на помощь реакция Вассермана.

Поэтапное описание анализа выглядит следующим образом:

1. Пациенту вводят препарат с кардиолипином с целью провоцирования РСК.
2. Следом за «провокатором» в дело вступает гемолитическая система, запускающая процесс гемолиза.
3. Сформировавшиеся комплексы нейтрализуются с помощью комплемента.

Если человек болен сифилисом, в его крови и спинномозговой жидкости сразу же после ввода «провокатора» начинают формироваться соединения «антиген-антитело», которые без проблем идентифицируются специалистами-лаборантами. Процесс прекращается тогда, когда иссякает кардиолипин, который вводят в строго ограниченном объеме. Далее в дело вступает комплемент, обезвреживающий образовавшиеся соединения. После того, как данное вещество выполнит свою задачу, специалисты, проводящие исследование, заполняют таблицу, где указывают, с какой скоростью протекала РСК и сколько комплексов образовалось за отведенный промежуток времени. Интенсивность реакции оценивается по шкале от (+) до (++++). От полученных результатов зависит, как и чем будут лечить пациента и то, сколько времени это займет.

Если человек здоров, кардиолипин нейтрализуется еще на стадии введения гемолитической системы. Ввиду отсутствия в крови и спинномозговой жидкости пациента специфических антител, введенный ранее антиген не образует комплексы, а вступает в реакцию гемолиза, вследствие чего его активность довольно быстро сходит на нет.

Микробиологическая диагностика

Наряду с серологической диагностикой методика обнаружения бледных трепонем (микробиологическая диагностика) играет важную роль, особенно в период серонегативного сифилиса, когда еще в крови отсутствуют антитела, но уже есть первые проявления свежего первичного сифилиса (твердый шанкр).

Биологическим материалом для исследования служит отделяемое с поверхности твердых язв (шанкров), содержимое пустулезных сифилидов, мокнущих и эрозивных папул, пунктаты инфицированных лимфатических узлов, ликвор и амниотическая жидкость, для проведения ПЦР — кровь.

Наилучшей методикой обнаружения возбудителей сифилиса является исследование биологического материала в темном поле микроскопа. Данная методика позволяет увидеть бледные трепонемы в живом состоянии изучить ее особенности строения и движения, отличить патогенные возбудители от сапрофитов.

Рис. 15. Анализ на сифилис — темнопольная микроскопия.

Рис. 16. При изучении сухих мазков используется окраска по Романовскому-Гимзе. Бледные трепонемы окрашиваются при этом в розовый цвет, все остальные виды спирохет — в фиолетовый.

Обнаружение бледных трепонем при микроскопии в темном поле — абсолютный критерий окончательной диагностики сифилиса.

Рис. 17. Для выявления бактерий применяется реакция иммунофлюоресценции (РИФ) — трепонемный тест. Специфический комплекс антиген- антитело при соединении со специфической сывороткой, меченной флюорохромом, в свете люминесцентного микроскопа дает свечение бактерий зеленоватым цветом.

Рис. 18. Возбудители сифилиса хорошо просматриваются в мазках, приготовленных по методике Левадити (импрегнация серебром). Бледные трепонемы темного цвета на фоне желтой окраски клеток инфицированных тканей.

Рис. 19. Возбудитель сифилиса при многократном увеличении.

Рис. 20. На фото колонии бледных трепонем. Получить культуру бактерий тяжело. Они практически не растут на искусственных питательных средах. На средах, содержащих лошадиную и кроличью сыворотки, колонии появляются на 3 — 9 сутки.

Показания к исследованию

Лицам, планирующим беременность, тест обязателен

Показаниями к исследованию в первую очередь являются контакт с человеком, больным сифилисом (в том числе бытовой), а также планируемая или имеющаяся беременность. Кроме того, очень часто реакция Вассермана проводится заранее перед плановыми операциями или поступлением в стационар, реабилитационных центр или дом ухода за пожилыми людьми.

Кроме этого существует ряд симптомов, при наличии которых стоит сдать анализ, чтобы исключить инфицирование:

1. Высыпания на коже в виде светлых пятен и «звездочек»;
2. Болезненность и припухлость в области половых органов;
3. Появление необычных выделений из гениталий;
4. Наличие твердого шанкра на любом участке тела (чаще всего располагается в половой области, во рту), шанкр представляет из себя язву или своеобразный «прыщ», который отличается значительным размером, но при этом безболезненный.
5. Повышенная температура тела, не связанная с какими-либо болезненными проявлениями;
6. Боли в руках и ногах (когда отсутствует заболевание костно-мышечной системы);
7. Появление под кожей в области паховой складки, под мышками или на шее, за ушами или под челюстью уплотнений, похожих при прощупывании на небольшие шарики.

Расшифровка

Исследование крови по Вассерману должен расшифровывать только квалифицированный врач. Результаты могут указывать не только на отрицательную или положительную реакцию, но и на промежуточную. Только специалист сможет правильно интерпретировать данные и не пугать раньше времени пациента. Типичный отрицательный результат обозначается знаком «-» и говорит о несомненном отсутствии сифилиса в организме человека.

Положительная реакция

При оценке концентрации антител положительное проявление может отмечаться одним, двумя, тремя или четырьмя плюсами. В расшифровке могут встречаться следующие обозначения:

1. «+» и «++» — результат указывает на сомнительную, слабоположительную микрореакцию. Необходимо провести дополнительные диагностические анализы и обследование. Можно через некоторое время повторить анализ Августа Вассермана, потому что полной уверенности в отсутствии или наличии сифилиса нет. Причиной такого результата может стать нарушение подготовительных процедур перед сдачей крови.
2. «+++» — положительная реакция. Дополнительного или повторного подтверждения не требуется, у пациента есть сифилис и должен пройти полное обследование. Женщинам назначают мазок из влагалища или матки, мужчины сдают материал из уретры. Такой результат редко бывает ошибочным, но могут назначить уточняющие анализы, если симптомы больного схожи на другие заболевания.
3. «++++» — окончательный положительный результат. Высокая интенсивность реакции.
4. «++++» — окончательная положительная реакция. Полученный результат достоверный на 100% и не требует никаких дополнительных анализов. Диагноз – сифилис.

Ложноположительная реакции Вассермана

Такой ответ может получить абсолютно здоровый человек, происходит это по конкретным причинам. Происходит такая реакция, если у пациента есть острые или хронические стадии заболевания, недавно сделанные прививки или были недавно получены физические травмы. Все эти состояния приводят к активной выработки неспецифического белка в организме, который называют антителами или иммуноглобулином. Анализ RW направлен на выявления эти белков и распознает как сифилитические. Это и становится основой для получения ложноположительного результата.

Причины

Выше было описано, почему при проведении теста на сифилис пациент может получить ложно положительный результат. Вот перечень состояний, который могут к этому привести:

• инфаркт миокарда;
• алкогольное, пищевое отравление;
• острые, хронические патологии печении, гепатит Д, С, В;
• травмы мягких тканей или костей;
• возрастные изменения в работе организма больного;
• туберкулез;
• болезни аутоиммунного характера.

Течение сифилиса и возможности РВ на разных этапах заболевания

Сифилис – считается классической венерической болезнью. Основным путем передачи возбудителя является половой контакт. Также не исключается заражение через кровь и внутриутробно от больной матери плода. Бледная трепонема не может долго выживать в сухих местах, что существенно снижает вероятность передачи возбудителя бытовым путем.

Но полностью нельзя исключать этот вариант заражения, так как во влажных, к примеру, выделениях организма (слюне, слизи и др.) она может находиться весьма продолжительное время. В процессе развития сифилиса выделяется три периода – первичный, вторичный и третичный. Для каждого характерны определенные временные рамки, симптоматика, а также вероятность, с которой анализ на РВ показывает наличие возбудителя.

Первичный период

На этом этапе развития, длящегося 5–6 недель от попадания возбудителя в организм, наблюдается появление характерной только для сифилиса язвы, которая называется твердый шанкр. Она формируется в местах попадания инфекции – половые органы, слизистые прямой кишки или рта. Немного позже происходит увеличение близлежащих лимфоузлов – чаще всего паховых, если локализация болезни в половых органах, и подчелюстных, если в ротовой полости.

Шанкр пропадает самостоятельно, без назначения терапии, примерно через 3–6 недель после образования. На первичном этапе заболевания сложно определить присутствие возбудителя в образце плазмы, и анализ РВ, взятый в этот период, может быть и ложноотрицательным. При наличии первичной симптоматики, характерной для сифилиса, такое обследование нужно повторить через 10–14 дней. Возможно, удастся подтвердить заболевание.

Вторичный период

Проявления вторичного сифилиса отмечаются примерно через 4–10 недель после образования твердого шанкра. Они выглядят как бледные высыпания по всему телу, общее недомогание, головная боль и увеличение температуры тела. Симптомы очень напоминают грипп, но при этом происходит набухание лимфатических узлов. Позже признаки пропадают и потом появляются, время от времени. На этом этапе заболевания в подавляющем большинстве случае антитела к бледной трепонеме обнаруживаются и диагноз установить несложно.

Третичный период

Данный этап развития болезни сопровождается поражением нервной костной системы, а также большинства внутренних органов. Такие изменения характерны при многолетней продолжительности заболевания, если не применяется должного лечения. И даже на этом этапе сифилис можно не обнаружить, если взять кровь на RW в период ремиссии.

Из всего описанного становится понятно, что у таких пациентов может в течение длительного времени не быть никаких признаков болезни, и даже инкубационный период может затянуться. Это связано с состоянием и качеством функционирования иммунной системы. В отдельных случаях при контакте с возбудителем сифилис не развивается, но человек становится бессимптомным носителем инфекции.

Тогда анализ крови на РВ становится чуть ли не единственной методикой, позволяющей выявить присутствие опасного микроорганизма, а также установить, как долго он пребывает в теле человека. Но все же иногда для получения полной серологической картины проводятся дополнительные, более конкретные диагностические процедуры.

Как оцениваются результаты

Нормой или отрицательным результатом реакции Вассермана (отсутствие заражения сифилисом) считается протекание реакции гемолиза. В этом случае в крови отсутствуют антитела к сифилитическому возбудителю, а все введенные антигены нейтрализуются гемолитической системой.

Положительный результат, т.е. наличие заражения, оценивается путем сравнительного анализа с контрольными образцами. Степень тяжести болезни или ее стадия обозначается количеством знаков «плюс»:

• (+) или (1+): небольшая задержка гемолиза;
• (++) или (2+): слабо положительная реакция или частичная задержка гемолиза;
• (+++) или (3+): положительная реакция или значительная задержка гемолиза;
• (++++) или (4+): резко положительная реакция или полное отсутствие гемолиза.

Кроме того, существует такое понятие, как сомнительная реакция, обозначающаяся в виде (+/-). Такая реакция требует перепроверки и уточнения. При проведении оценки реакции Вассермана следует учитывать такой факт: у 4-6% здоровых людей наблюдается ложноположительный результат, а у зараженных людей (до 25%) может наблюдаться ложноотрицательный результат в течение 14-18 суток после инфицирования бледной трепонемой. Ложноотрицательные результаты меняются по мере развития болезни: после 4-6 недель болезни до 26% результатов становятся положительными, а к 8-9 неделе почти все они дают положительную реакцию.

Отрицательный результат в скрытом периоде второй фазы сифилиса не всегда свидетельствует об отсутствии болезни. При рецидиве сифилиса реакция становится положительной. После проведения лечебного курса отрицательный результат указывает только на благоприятную тенденцию, но требует перепроверки. Другая проблема оценки эффективности лечения — появление синдрома, так называемого серорезистентного сифилиса, когда после излечения реакция Вассермана все равно дает отрицательный результат.

В частности, ложноположительная реакция может возникнуть в следующих случаях:

• прием алкоголя;
• беременность;
• болезни соединительных тканей системного характера;
• пневмония;
• туберкулез;
• онкология;
• осложненные печеночные патологии;
• сахарный диабет;
• скарлатина;
• брюшной тиф;
• инвазии паразитов;
• малярия;
• лептоспироз;
• месячные у женщин.

Ложный результат может проявиться даже при употреблении жирной пищи непосредственно перед исследованиями.

https://youtube.com/watch?v=Vb3MUM4x9r4

Результаты реакции Вассермана нельзя расценивать как истину в последней инстанции. Они, скорее, дают импульс для проведения дополнительных обследований. Для этих целей в настоящее время применяются различные трепонемные тесты. К современным методикам экспресс-диагностики сифилиса относятся усовершенствованные аналоги реакции Вассермана: тест RPR, который дополняется трепонемными тестами РПГА.

Реакция Вассермана сыграла огромную роль в развитии диагностирования сифилиса на ранних стадиях. Однако ее результаты не всегда однозначно оценивают наличие болезни, в связи с чем в настоящее время применяются более совершенные способы, принцип функционирования которых взят из классической реакции Вассермана. Исследования данного типа, в основном, продолжают использоваться при контроле лечебного процесса, но могут применяться и для выявления сифилиса.