Анализ крови на пцр

Анализ методом ПЦР

ПЦР анализ — что это такое? Это метод использует принципы молекулярной биологии. Для исследования материала применяются особые ферменты, которые многократно и быстро копируют ДНК, РНК фрагменты возбудителей болезни. Существует разные виды ПЦР анализа в зависимости от исследуемого материала (кровь, моча, кал и т.д.). После обработки сотрудники лаборатории сравнивают с базой данных полученный результат, выявляют концентрацию, тип возбудителя.

Анализ на ПЦР помещают в специальный амплификатор (прибор), который нагревает и охлаждает пробирки с биоматериалом. Изменения температуры нужны для репликации фрагментов. Точность результата будет зависеть от точности температурного режима. Метод полимеразной цепной реакции помогает выявить:

• инфекционный мононуклеоз;
• ВИЧ;
• цитомегаловирусную инфекцию;
• вирусные гепатиты G, C, B, A;
• инфекции/заболевания, передающиеся половым путем (ИППП/ЗППП): гарднереллез, трихомониаз, уреаплазмоз;
• герпетическую инфекцию;
• онкогенные вирусы;
• листериоз;
• хеликобактерную инфекцию;
• клещевой энцефалит, боррелиоз;
• туберкулез;
• кандидоз.

Крови

На данный момент из-за новизны технологии анализ крови методом ПЦР все еще имеет высокую цену. Для подготовки биоматериала не нужно соблюдать определенные требования. Даже вызванные физическими нагрузками, стрессами, сменой рациона питания изменения состава не влияют на результат исследования. ПЦР анализ крови может испортить только прием антибактериальных средств, поэтому перед сдачей необходимо выдержать паузу между лечением и тестом.

ПЦР исследование крови – самый распространенный вариант диагностики хронических, острых инфекционных патологий при вирусном или атипичном проявлении. Серологические методы исследования имеют определенную трудность при проведении – определение наличия возбудителя проводится по наличию антител в организме человека. Результат мог быть ложноотрицательным, если состояние больного не давало время для их выработки.

Мазка

В сфере гинекологии для исследования наличия инфекционных микроорганизмов используют ПЦР анализ мазка. Работа с материалом проводится по тому же принципу, что и с кровью: многократное увеличение фрагментов ДНК возбудителя, чтобы с легкостью его идентифицировать. Это же помогает обнаружить скрытые инфекции у женщины. Для проведения анализа могут быть взяты разные биологические жидкости: слюна, мокрота, моча, кровь. В гинекологии для точности определения чаще используется мазок со слизистой влагалища из цервикального канала.

Для проведения ПЦР существуют определенные показания. Нередко его нужно сделать, чтобы выявить устойчивый к антибиотикам вид возбудителя. У женщин основными показаниями для диагностики по этому методу выступают:

• беременность, которая протекает тяжело;
• острая фаза ИППП;
• если есть подозрение на переход ИППП в хроническую стадию;
• поиск причин бесплодия.

Кала­

Для выявления инфекции может быть назначен со стороны врача анализ кала на ПЦР. Для того, чтобы получить максимально достоверные результаты после теста, необходимо придерживаться следующих правил перед забором биоматериала:

• за несколько суток прекратить прием слабительных препаратов: масла, свечи;
• исключить медикаменты, которые дают специфическую окраску калу, к примеру, с содержанием железа.

Для забора следует использовать стерильную палочку и контейнер. Чем-либо их дополнительно протирать, ополаскивать не нужно. При сборе материала будьте осторожны, вы не должны задеть рукой внутренние стенки контейнера. Следите, чтобы в кале не было примесей мочи, нельзя использовать дополнительные вспомогательные средства для испражнения (клизма). Собирать материал нужно в день сдачи, хватит 1/3 объема контейнера. Данный метод диагностики имеет следующие преимущества:

1. Анализ способен указывать на ДНК паразита, другие же тесты могут определять только остатки их жизнедеятельности.
2. Высокая точность, будет установлен возбудитель.
3. Ультрачувствительный анализ, который способен выявить даже одну клетку вируса.
4. Результат исследования ПЦР будет готов через 4-5 часов.

Мочи

При необходимости для проведения теста врач может взять для исследования мочу. Высокая точность открывает возможность работать с любой биологической жидкостью, из которой удается извлечь ДНК вируса. Чтобы сдать анализ мочи ПЦР, нужно придерживаться таких ограничений перед забором материала:

• минимум за 1 день до процедуры прекратить половые контакты;
• за 3 недели до сдачи должно быть окончено любое антибактериальное лечение, потому что медикаменты смажут картину;
• сдавать анализ нужно натощак (жидкость тоже запрещена);
• брать нужно первую утреннюю порцию материала.

Виды анализов на ЗППП

При проведении лабораторных исследований устанавливается точный диагноз и назначается терапия, направленная именно на устранение выявленных возбудителей.

Наиболее эффективными методами считаются:

• анализ крови;
• анализ мочи;
• соскоб из уретры и цервикального канала;
• исследование спермы;
• анализ секрета простаты.

Анализ крови

Анализ крови на ИППП выполняется методом прямой и непрямой иммунной флюоресценции. Материал окрашивают особыми антителами в сочетании с красителями.

Например, достоверность подобного исследования достигает при выявлении:

• сифилиса — 100%;
• микоплазмоза – до 70%;
• хламидиоза – 98%.

Можно выделить следующие исследования:

• анализ крови на TORCH инфекции: токсоплазмоз, краснуха и цитомегаловирус;
• RW – реакция Вассермана (применяется для выявления сифилиса);
• ВИЧ-инфекции, гепатиты B и C.

Анализ мочи

С помощью общего анализа мочи диагностируется воспалительный процесс в мочеполовой системе, а также наличие инфекции.

Для ПЦР мочу сдают в основном мужчины. Единственным и главным недостатком такого метода обследования является то, что можно установить лишь сам факт наличия бактерий, но невозможно определить их количество.

Соскоб из уретры и цервикального канала

Эта диагностика является наиболее эффективной для определения ИППП. Методика совершенно безопасная и безболезненная. Мазок позволяет обнаружить как наличие вредных микроорганизмов, так и их количество.

Забор проводится следующим способом: врач соскабливает материал из уретры и цервикального канала (только у женщин) с помощью специальных инструментов.

Сперма и секрет простаты

Метод диагностики предназначен для обнаружения в биоматериале:

• специфических фрагментов ДНК основных возбудителей инфекций, которые могут передаваться половым путём;
• урогенитальных инфекций мочеполовой системы у мужчин (к ним относятся: гонорея, хламидиоз, трихомониаз, микоплазмоз, уреаплазмоз).

Главным преимуществом диагностики является установление не только наличия возбудителей, но и определение точного их количества.

Семенную жидкость пациент собирает самостоятельно в контейнер. Секрет простаты собирает врач после массажа предстательной железы.

Спектр возможностей ПЦР в диагностике инфекций

Анализ полимеразной цепной реакции крови используется для выявления ЗППП (заболеваний, передающихся половым путем) и урогенитальных инфекций, инфекционных болезней легких, печени, пищеварительной системы, так называемых, детских болезней.

Краткий перечень возбудителей и заболеваний, определяемых по крови, мазку и моче

Вирусы
герпесовирус	1 тип	обычный герпес
2 тип	генитальный герпес
3 тип	краснуха
4 тип (цитомегаловирус)	цитомегалия
5 тип (Эпштейн-Барр)	инфекционный мононуклеоз
папилломы человека (21 штамм)	папилломатоз
HAV, HBV, HCV	гепатит А, В, С
иммунодефицита	ВИЧ, СПИД
Бактерии
бледная трепонема	сифилис
гарднереллы	гарднереллез
гонококки	гонорея
уреаплазма	уреаплазмоз
сальмонелла	сальмонеллез
палочка Коха	туберкулез
листерия	листериоз
стрептококки и стафилококки	сепсис, пневмония, менингит
Паразиты, прокариоты, простейшие
описторхи (печеночные сосальщики)	описторхоз
плазмодий	малярия
токсоплазма	токсоплазмоз
лямблии	лямблиоз
хламидии	хламидиоз
трихомонада	трихомониаз
микоплазма	микоплазмоз
эхинококки	эхинококкоз
шистосомы	шистосомоз
цестоды	альвеококкоз

Комплексный анализ на ЗППП носит название «профиль ПЦР-12», по количеству определяемых возбудителей. В профиль входят половые инфекции:

• хламидиоз;
• гонорея;
• трихомониаз;
• сифилис;
• ВИЧ;
• обычный и генитальный герпес;
• цитомегалия и инфекционный мононуклеоз;
• папилломатоз;
• гепатиты В, С.

А также микоплазмоз и уреаплазмоз – не относящиеся к венерическим болезням, но передающиеся при интимной близости. Отдельный анализ крови ПЦР на кандидоз (молочницу) практикуется редко, поскольку заболевание легко выявляется по мазку из влагалища (у мужчин из уретры).

Показания к проведению ПЦР-12

Прямыми показаниями являются симптоматические проявления, характерные для половых инфекций:

• длительная фебрильная (38-39 ℃) температура тела;
• увеличение лимфатических узлов;
• кожная сыпь;
• зудящие высыпания в области наружных половых органов;
• поллакиурия (учащенное мочеиспускание), сопровождающаяся жжением в уретре;
• боли в нижней части живота, иррадиирующие в поясницу;
• диспареуния (болезненные ощущения во время интимной близости и после секса);
• лейкоррея у женщин (неспецифические влагалищные выделения с неприятным запахом) и выделение слизи из уретры у мужчин.

ПЦР-12 рекомендовано пройти при планировании беременности.

Основные симптомы и осложнения половых инфекционных заболеваний

Основные принципы

Итак, ПЦР — это многократное копирование определенных фрагментов ДНК in vitro в процессе повторяющихся температурных циклов. Как же протекает процесс реакции в пределах одного температурного цикла?

Образование нуклеотидной цепи осуществляется ферментом ДНК-полимеразой. Однако для начала работы ферменту необходима стартовая площадка. В качестве площадок выступают «праймеры» (затравки) — синтетические олигонуклеотиды длиной 15-20 нуклеотидов. Праймеров должно быть два (прямой и обратный), они комплементарны участкам ДНК-матрицы и именно фрагмент ДНК, ограниченный праймерами, будет многократно копироваться ДНК-полимеразой. Работа полимеразы заключается в последовательном добавлении нуклеотидов, комплементарных последовательности ДНК-матрицы. Тем самым в одном температурном цикле вновь синтезируется два новых фрагмента ДНК (т.к. молекула ДНК — двуцепочечная, то и матриц изначально две). Таким образом, за 25-35 циклов в пробирке накапливаются миллиарды копий участка ДНК, определенного праймерами. Структуру отдельного цикла можно представить следующим образом:

1. денатурация ДНК (плавление, расхождение цепей ДНК) — 95°С — 1 или 2 минуты;
2. отжиг праймеров (затравки связываются с ДНК-матрицей, температура данной стадии определяется нуклеотидным составом праймера) — 60°С (к примеру) — 1 минута;
3. элонгация ДНК (полимераза синтезирует цепь ДНК) — 72°С — 1 минута (время зависит от длины синтезируемого фрагмента).

Достоинства и недостатки метода ПЦР

Современные методы позволяют точно подобрать набор веществ, нужных для реакции, а значит, «достроить» именно ДНК SARS-Cov-2, а не другого похожего.

Теперь о недостатках. Первое — относительно высокая цена. Она обусловлена высокой себестоимостью как праймеров, так и оборудования – амплификаторов. Второе — время. Ждать, пока размножится ДНК, нужно несколько часов, а с учетом транспортировки до лаборатории результаты теста пациент может узнать через сутки и более.

Также эффективность теста не превышает 80%. Праймеры для реакции подбираются на основе информации об РНК вируса. Но фрагмент с теми же «буквами» может оказаться и в других микроорганизмах пробы – отсюда ложноположительный результат. Ложноотрицательный результат получится, если вирусные частицы ушли из ротоглотки, спустились дальше по дыхательному пути. Тогда в пробе просто не окажется РНК вируса.

Сдавать тест ПЦР есть смысл в том случае, если человек контактировал с пациентом с подтвержденным коронавирусом.

Плюсы и минусы анализа ПЦР

• Достоинством методики является то, что в отличие от культуральных методов исследования, для выявления инфекции не требуется накопления агентов в организме. А в отличие от серологических анализов крови нет необходимости выжидать выработки антител к антигенам бактерий, вирусов, грибов или простейших. От момента заражения можно проводить тестирование. Идеальным можно считать ситуацию, когда интерпретация результатов проводится в день обращения к врачу. ПЦР выигрывает сравнение с ИФА и посевом по всем показателям, кроме одного: способности принимать прошлую инфекцию за настоящую в связи с высокой чувствительностью.
• Погрешности методики, приводящие к ложным результатам, в основном завязаны на неправильный выбор биологических образцов, удаленных от места воспалительных изменений или загрязнением их посторонней инфекцией в процессе забора или транспортировки, нельзя полностью полагаться на диагностику крови. Для половых инфекций предпочтительнее исследовать соскобы урогенитального эпителия.
• Еще одним аспектом становятся погрешности на этапе выполнения лабораторного этапа: старое оборудование, недостаточная квалификация персонала.
• Поэтому всегда предпочтительнее выбирать для исследования клинику с репутацией. Оснащенную современным оборудованием и расходниками и совмещающую в себе консультативный прием специалистов и лабораторные мощности.

Как проводится исследование по методу ПЦР

В связи с тем, что коронавирус относится к РНК-содержащим, смысл ПЦР-теста в быстром прямом поиске любых остатков РНК микроба с их предварительным удвоением до цепочки ДНК.

Для анализа берут мазок из зева или кровь из вены.

После этого взятый материал помещают в особые контейнеры, ставят маркировку, опечатывают, перевозят в лабораторию. Сопровождает такой «груз» медработник, одетый в специальный защитный костюм и с соблюдением техники безопасности.

В лаборатории из полученного материала сотрудники выделяют фрагменты РНК-вируса, обратной транскрипцией удваивают моноцепочку РНК до ДНК — матрицы вируса, которую затем размножают не один раз посредством особого фермента полимеразы. Наименование теста и пошло отсюда. Суть в том, что эта РНК особенная и к коронавирусной РНК можно присоединить только такую же цепочку вируса с целью ее удвоения.

Дублей может быть до 45. После этого снова расщепляют полимеразные цепочки. В этот момент на стадии обратного преобразования ДНК в РНК выявляют SARS-CoV-2 или другой вирус, который необходимо было обнаружить. Для этого применяют электрофорез, т. к. благодаря ему можно увидеть все размноженные копии ДНК.

У ДНК отрицательный электрозаряд, а потому она притягивается к положительному полюсу и меняет цвет, проходя через краситель — становится яркой. Если в изучаемом материале вирусная инфекция отсутствует, то и первая цепочка ДНК не будет выстроена, поскольку не за что будет зацепиться, чтобы выстроить двойную цепь. Следовательно, электрофорез ничего не сможет показать, цвета не будет.

Будете ли вы вакцинироваться от коронавируса?
Нет, однозначно 43.2%

Да, конечно 28.58%

Да, но сначала понаблюдаю как на нее реагируют другие 28.21%
Проголосовало: 15628

Диагностика методом ПЦР – выявление и диагностирование

Метод ПЦР – это такое исследование, которое выявляет фактически весь спектр возбудителей вирусного и бактериального характера. Полимеразная реакция, как диагностика заболеваний у мужчин, женщин и детей, показывает результаты исследований в различных областях медицины: гинекологии, урологии, терапии и так далее.

В частности, при сдаче крови идентифицируют такие заболевания:

• гепатиты вирусного характера: А, В, С и D, ТТ – сдается кровь;
• цитомегаловирус;
• ВИЧ;
• вирусы герпеса (обнаруживаются не только у мужчин и женщин, но и у детей соскоб показывает результат);
• опоясывающий лишай;
• инфекция энтеровирусная;
• токсоплазмоз;
• краснуху;
• коклюш;
• листериоз (сдается соскоб тканей лимфоузлов, кровь, околоплодные воды и т.д.) и прочее.

Стоит отметить, что цитомегаловирус является бессимптомным заболеванием. То есть человек со здоровой иммунной системой может носить в организме цитомегаловирус без знания проблемы заболевания. Цитомегаловирус наделен 60-тидневным инкубационным периодом. Запущенная форма болезни опасна для мужчин, при беременности, и порождает, как цепная реакция, энцефалит, пневмонию и прочие заболевания.

Методика ПЦР выявляет коклюш – острое инфекционное заболевание дыхательных путей (верхних), опасное так же при беременности, для детей и мужчин. Коклюш передается воздушно-капельным путем. Фактически 90% людей при контакте с больным, должны сдать анализ на коклюш, поскольку инфекция отличается повышенной контагиозностью.

При беременности коклюш может вызвать асфиксию плода. У мужчин, детей, женщин при беременности коклюш в запущенном виде поражает, как цепная реакция, сердечно сосудистую систему, легкие, бронхи. Чтобы обнаружить коклюш для исследования у мужчин, женщин и деток, берется соскоб либо мазок полости рта, кровь из вены/пальца, мокрота и моча.

Кроме крови ПЦР исследует иного рода биоматериалы: фрагменты мочи, соскоб, мазки, слюну у мужчин, детей, женщин и обязательно при беременности околоплодные воды по назначению врача, ведь стоимость исследования не мала. Частные лаборатории устанавливают собственную стоимость на производимые анализы.

Диагностика типового плана крайне важна, поэтому стоимость играет меньшую роль в определении заболевания. При получении ложноотрицательных результатов с лаборатории расшифровка их уже не важна, а болезнь может быть не идентифицирована и запущена цепная реакция инфецирования всего организма.

Ход анализа полимеразной цепной реакции

Анализ ПЦР происходит в 4 основных этапа:

• подготовка материала к копированию;
• объединение фрагмента ДНК и праймера;
• копирование генетического набора исследуемого материала;
• идентификация и оценка полученного ДНК-набора.

Этап 1

Образец подогревают до температуры 94-98°C в специальном приборе — амплификаторе, который программируется на выдерживание точных температур с низкой погрешностью. Заданная температура держится на протяжении минуты-двух. Это необходимо для денатурации ДНК, чтобы двойная спираль разошлась на две отдельные цепочки.

Этап 2

Температура в амплификаторе понижается до 72-75°C для того, чтобы праймер смог распознать сходный с ним участок ДНК-цепи и объединиться с ним.

Праймеры — это специальные реагенты, которые подходят только к одному виду возбудителя. Если необходимо провести анализ на несколько патогенов, то в образец добавляют необходимое количество праймеров.

На этой стадии ДНК реплицирует свою матрицу, используя праймер.

Возможности лаборатории ограничены наличием праймеров для определенных микроорганизмов, поэтому диапазон возможностей определяется наличием таких образцов.

Этап 3

В этом отрезке происходит увеличение генетического материала возбудителя. К праймеру с матрицей приближается фермент и воспроизводит новую цепь ДНК, идентичную той, которая содержалась в первоначальной цепочке.

Когда синтез окончен, завершается один полный цикл полимеразной цепной реакции. По времени он продолжается в среднем до 3 минут. За это время происходит удваивание материала. Дальнейшее увеличение количества цепочек происходит в геометрической прогрессии, и к окончанию анализа успевает пройти 50-80 циклов.

Этап 4

Этап, требующий внимательности и особой тщательности со стороны персонала.

Определение микроорганизма происходит с использованием электрофореза или меток, наносимых окраской. При использовании электрофореза определяющим моментом становится длина фрагментов ДНК, а при использовании меток — развитие окраски в ходе ферментативной реакции.

В каких областях медицины применяется этот метод?

Для чего выполняется копирование ДНК и как это может послужить медицине?

• Выделять и клонировать гены.
• Диагностировать генетические и инфекционные заболевания.
• Определять отцовство. Ребенок частично наследует от своих биологических родителей генетические особенности, однако имеет при этом свою собственную уникальную генетическую идентификацию. Наличие у него некоторых генов, идентичных родительским генам – позволяет говорить об установлении родства.

• В пульмонологической практике – для дифференциации бактериальных и вирусных видов пневмонии, туберкулёза.
• В гинекологической и урологической практике – для определения уреаплазмоза, хламидиоза, микоплазменной инфекции, гарднереллеза, герпеса, гонореи.
• В гастроэнтерологической практике.
• В гематологии – для определения онковирусов и цитомегаловирусной инфекции.
• В экспресс-диагностике таких инфекционных заболеваний как вирусные гепатиты, дифтерия, сальмонеллёз.

гепатитов вирусной этиологии, ВИЧ, венерических заболеваний, туберкулёза, клещевого энцефалита

Специфика метода ПЦР крови на инфекции

Анализ крови на ПЦР (PCR) обнаруживает активных инфекционных агентов и неактивных патогенов, погибших под воздействием медицинских препаратов, на любом этапе развития болезни. Такая способность обусловлена выявлением не просто возбудителя инфекции, а его генома:

• ДНК (дезоксирибонуклеиновой кислоты) бактерий, паразитов, грибков;
• РНК (рибонуклеиновой кислоты) вирусов.

Пробирку с образцом крови, взятой у пациента, размещают в амплификаторе – реакторе, обеспечивающем последовательное нагревание и охлаждение образца. К биоматериалу добавляют реакционную смесь. В амплификаторе производится более 30 циклов смены температурного режима, каждый из которых включает 3 этапа (денатурацию, отжиг праймеров, элонгацию).

В ходе многократной реакции амплификации:

• разрываются водородные цепи макромолекул (ДНК и РНК);
• образуются комплементарные комплексы матрицы с короткими фрагментами РНК и ДНК (праймеры);
• термостойка ДНК-полимераза достраивает матричную цепь, и формирует множественные генетические копии возбудителя.

При достаточном количестве копий амплификатор дает качественно-количественную оценку обнаруженному возбудителю. Таким образом, молекулярная диагностика решает три задачи одновременно:

• обнаруживает инфекционного агента;
• дифференцирует его принадлежность (вирус, бактерия и т. д) и разновидность;
• определяет дальнейшую тактику лечения и выбор медикаментов (в соответствии с установленным заболеванием).

ПЦР крови применяют для определения вирусов и бактерий либо тяжелых паразитарных внекишечных инвазий. Генная информация является уникальной, поэтому точность исследования ПЦР практически 100%. Рolymerase Сhain Reaction определяет инфекцию даже при отсутствии активности возбудителя и выраженных симптомов болезни.

Кому делают ПЦР-тест на коронавирус

На коронавирус проверяются не все, а только граждане, у которых найдены те или иные признаки инфекции. А именно:

1. В группе риска находятся люди, зараженные острыми респираторными вирусными инфекциями. Они представляют интерес, потому что иммунитет ослаблен, а значит, и риск подхватить COVID-19 для них выше. Еще больше рискуют заразиться те, кто страдает несколькими заболеваниями.
2. Также тест должны делать туристы, недавно вернувшиеся из-за рубежа.
3. Пожилые люди тоже могут заболеть коронавирусом, потому что их иммунитет слабее, чем у молодых. Тестировать необходимо стариков, попавших под подозрение на ОРВИ.

Преимущества и недостатки подхода

У диагностики методом ПЦР много плюсов:

Высокая чувствительность. Метод позволяет выявить возбудителя болезни даже при наличии нескольких молекул его ДНК, то есть на очень ранних стадиях, при хронической форме заболевания, а также в случаях, когда болезнь никак себя не проявляет, протекая латентно.

Универсальность. Для проведения анализа подходит почти любой биоматериал – от крови и слюны до клеток кожи. Широкий охват. Исследование одного образца может выявить сразу несколько возбудителей болезни.

Оперативность. Результат, как правило, готов через 5–7 часов, то есть получить заключение можно уже на следующий день после забора биоматериала.

Точность. Метод ПЦР практически никогда не дает ложноположительных или ложноотрицательных результатов, если была соблюдена технология проведения этого анализа.

Однако следует понимать, что совершенных методов анализа не бывает. У ПЦР есть и минус –  высокие требования к соблюдению технологии и к профессионализму лаборантов. Если образец был загрязнен, анализ может дать ложный результат. Поэтому проводить ПЦР-диагностику желательно только в самых лучших лабораториях, где внедрены системы контроля качества работы.

Какие варианты проведения имеет метод ПЦР?

Наиболее популярными вариантами в лабораториях диагностических являются:

• с обратной транскрипцией ПЦР;
• с «горячим» стартом ПЦР – в реакционную среду вводятся блокирующие активность полимеразы антитела, что обеспечивает запуск реакции в строго определенный момент;
• с анализом результатов по «конечной точке» ПЦР ‑ итог оценивается по наличию флуоресценции в неоткрытом сосуде, что устраняет риск загрязнения реакционной среды (применяются ДНК-зонды с флуорофорной меткой);
• в режиме «реального времени» ПЦР (ПЦР-РВ, Real-Time PCR) –метод количественный, в котором участвуют красители флуоресцентные, способные встраиваться внутрь спирали ДНК, увеличивая интенсивность свечения, и после каждого цикла копирования по интенсивности флуоресценции определяют количество воспроизведенных молекул;
• мультиплексная (мультипраймерная) ПЦР – в одном сосуде амплифицируется две и больше ДНК-последовательности, что позволяет определять несколько патогенов одновременно.

Для различных исследовательских целей применяются следующие варианты метода ПЦР:

• гнездовая («вложенная») – с двумя праймерными парами, где вторая пара воспроизводит участок ДНК молекулы, полученной в первой реакции, тем самым уменьшая число нежелательных реакций;
• «инвертированная» ‑ реализуется, когда известен только маленький фрагмент внутри искомой последовательности (ДНК разрезается ферментами рестриктазами, а затем закольцовывается так, чтобы известные кусочки оказались на конечных участках исследуемого фрагмента);
• асимметричная – применяется, если надо воспроизвести исключительно одну цепочку молекулы, поэтому один праймер берется в значительном избытке;
• молекулярных колоний метод – используется акриламидный гель, который полимеризуется с реагентами ПЦР на поверхности и в итоге реакции формируются молекулярные колонии в определенных зонах полимера;
• длинных фрагментов – проводится амплификация участков из 10 тысяч и более нуклеотидов;
• ступенчатая – начальные циклы проводятся в высокотемпературных условиях для повышения специфичности сцепления праймеров, а после накопления молекул температура снижается;
• случайных полиморфных фрагментов (RAPD) – дает возможность дифференцировать микроорганизмы с похожими по структуре ДНК;
• иммуно-ПЦР – исследуются антигены, а не нуклеиновые кислоты, путем предварительного присоединения антител с ДНК-меткой и последующим воспроизведением;
• групп-специфическая;
• с быстрой амплификацией концов кДНК;
• виртуальная и др.

Выяснив, для чего проводится ПЦР анализ, что это такое (цена заметно различается для разных методов), пациент понимает, чего ему ожидать от исследования.

Чего «боится» ПЦР, что она умеет и как к ней подготовиться?

Как в любых других исследованиях, иной раз результаты теста оказываются ложноположительными или ложноотрицательными, где ПЦР исключением не является. Подобное может происходить в случаях:

1. Нарушения технологического процесса на одном из этапов реакции;
2. Несоблюдения правил забора материала, его хранения или транспортировки;
3. Присутствие посторонних примесей в материале.

Это говорит о том, что к ПЦР – диагностике инфекций нужно подходить внимательно, осторожно и аккуратно, иначе образцы материала могут поменять свое структурное строение или вовсе разрушиться

Этапы ПЦР-диагностики. Ложные результаты могут дать нарушения на любом из этапов исследования

ПЦР-диагностика инфекций относится к категории «золотых стандартов» среди других лабораторных методов, поэтому ее можно применить для поиска возбудителей многих заболеваний, на первый взгляд не имеющих ничего общего между собой:

• Туберкулез различной локализации, пневмония (в том числе и атипичная, вызванная хламидией);
• Детские инфекции (коревая краснуха, паротит, корь);
• Дифтерия;
• Сальмонеллез;
• Зоонозная инфекционная болезнь – листериоз (заболевание характеризуется многообразием симптомов с поражением лимфоузлов, ЦНС, внутренних органов);
• Заболевания, обусловленные проникновением вируса Эпштейн-Барра (инфекционный мононуклеоз и др.);
• Онкологическая патология, спровоцированная папилломовирусной инфекцией (ВПЧ и его типы);
• Боррелиоз (болезнь Лайма, клещевой энцефалит);
• Хеликобактерная инфекция, возбудителем которой является проживающий в желудке человека микроб Helicobacter pylori. Доказано, что хеликобактер становится причиной развития рака желудка или 12-перстной кишки;
• Кандидоз и практически все ЗППП.

ПЦР-диагностика инфекций, передающихся половым путем, имеет особую значимость, поскольку заболевания, вызванные таким образом, часто длительное время протекают без каких бы то ни было клинических проявлений, зато при беременности начинают активизироваться и, таким образом, угрожать здоровью и даже жизни ребенка. Аналогично себя ведут и TORCH- инфекции. Некоторые из них («торч») относятся одновременно и к ИППП, поэтому последние требуют более подробного рассмотрения. Ознакомиться с самыми популярными методиками читатель сможет в следующих разделах статьи.

Как правильно подготовиться, чтобы получить достоверный результат?

Сразу заметим, что подготовка к ПЦР довольно простая, никаких особых усилий со стороны пациента не требующая. Нужно лишь выполнить три несложных задания:

1. Не иметь половых контактов за 24 часа до того, как сдать анализ;
2. Для забора и анализа крови из вены нужно прийти на голодный желудок, пить, кстати, тоже нельзя;
3. Сдать мочу следует ночную (утром – в стерильную баночку, приобретенную накануне в аптеке).