Серологические исследования крови в диагностике болезней

Принцип метода РНГА

При постановке реакции используются эритроциты (может использоваться латекс), которые имеют на своей стенке определенные антигены. К планшету с эритроцитами добавляется исследуемый материал. Если в нем имеются специфические антитела или белки определяемого возбудителя заболевания, то они вступают в связь с антигенами, слипаются и образуют видимый осадок.

Стандартный набор в основном содержит пустой планшет, эритроциты баранов, которые и имеют чувствительность к антигену выявляемого заболевания. Также в наборе присутствуют эритроциты, не имеющие антигенов. Контроли – положительный и отрицательный и стандартный реактив для разведения сывороток.

Самое главное в постановке реакции – это строгое соблюдение всех этапов. Для начала берут пустой планшет для РНГА, в лунки раскапываются последовательно заранее разведенные исследуемые образцы. В первую и последнюю лунки капают контроли. К сывороткам добавляют эритроциты со специфическими антигенами. Инкубируют планшет 2 часа.

Далее описывают визуальный результат. Он учитывается в крестах. Реакция считается верной только тогда, когда контроли прошли реакцию. Соответственно, в лунке с положительным контролем эритроциты располагаются по всему дну в виде хлопьев («зонтик»). В случае с отрицательным контролем на дне лунки выпадает маленькое четкое кольцо из эритроцитов («пуговка»).

Методы проведения СИ

Серологические анализы подразделяются на количественные и качественные. Качественные дают однозначный ответ о наличии или отсутствии в организме антител (Ат), антигенов (Аг). Количественные результаты отображаются в виде чисел со знаками + в количестве от 1 до 4. Самые распространенные в современной медицине методы СИ:

1. Агглютинация. Основана на принципе связывания Ат, Аг; что дает выпадение хлопьеобразного осадка в сыворотке.
2. Гемагглютинация. Применяются адсорбированные эритроциты.
3. Преципитация. Образование помутнения от связки Аг с Ат.
4. Коагглютинация. Выявление негативных антигенов при сывороточном введение антител, широко распространена адсорбция на белке стафилококка.
5. Подавление гемагглютинации. Подавление соединительной функции Аг со свободными эритроцитами.
6. Непрямая реакция Кумбса. Определение антител к антигенам эритроцитов.
7. Кольцепреципитация. Наслоение антигенов на лечебную сыворотку.
8. Двойная радиальная иммунодиффузия. Проникновение антигенов в лунки агар-агар питательной среды, растворенной в сыворотке
9. Реакция связывания комплемента. Индикатор – эритроциты барана в гемолитической сыворотке, который сигнализирует о смешивании предполагаемых Аг и Ат иммунитета.
10. Нейтрализация вирусов родными антителами.
11. Маркирование Ат и Аг флуоресцентным или ферментным составом. Иммунофлюоресцентный РИФ, иммуноферментный ИФА методы.

В сложных случаях – неясной клинической картине, высокой пандемичности и молниеносном распространении инфекции, специалистами лаборатории может быть принято решение о проверке одного показателя несколькими разными методами.

Обратите внимание! 

Серологический анализ крови является инструментом подтверждения или опровержения диагноза, но никак не способом первичной постановки.

Норма референтных показателей для каждого из методов подбирается индивидуально, зависит от пола, возраста, физиологического состояния больного. обследуемой болезни.

Иммунофлюоресцентный и иммуноферментный методы

Антитела, помеченные светящимся раствором, вводятся в сыворотку. В качестве меток чаще всего применяют флуороционат, который придает клеткам зеленое свечение под ультрафиолетовой лампой. Результат анализа качественный, базируется на яркости свечения. РИФ проводят прямым, непрямым методами, при котором сначала вводят обычные АТ, а затем маркированные для избежания неспецифической реакции цепи.

Метод ИФА основан на выявлении антител, антигенов путем маркирования ферментом какой-либо клетки. В результате химических реакций образуются окрашивания сыворотки в зависимости от того, есть ли злокачественные Аг и какие именно. В свою очередь, ИФА подразделяется на гомогенный и гетерогенны способ. Гомогенно исследуют в жидком растворе, а гетерогенно на твердой основе.

Расшифровка

В расшифровке на первом месте стоит приставка Anti, после которой следуют буквы T или G, что указывает на антитела или антигены. Ранние и поздние тела возбудителя болезни указываются как M и G соответсвенно. Например, анализ на гепатит на ранние антитела выглядет как Аnti-НАV IgМ, поздние Аnti-НАV IgG. Цифры со знаками + указывают на количество обнаруженых тел. Например, Аnti-НАV IgМ +11 и Аnti-НАV IgG +++ 1000 означает, что человек переболел гепатитом ранее, на данный момент воспалительного процесса в организме нет. HВsAg антиген, показывающий наличие заболевания. Аnti-НВе – признак вялотекущей формы гепатита.

По группам крови иная расшифровка – А, В и 0. 0 (+) – первая положительная группа крови, 0 (-) первая отрицательная. А0 и АА втораяя группа, ВВ и В0 третья, АВ четвертая. Знак + положительный резус, – отрицательный. При исследовании крови матери и эмбриона, результаты матери пишут первыми, через дробную черту плода. Если обнаружен резус конфликт, то в конце ставят три восклицательных знака.

Какие инфекции помогает выявить серологическое исследование.

Серологическая диагностика позволяет выявить возбудителя

СИ позволяют выявить определённое заболевание при наличии на него подозрения, то есть в основе анализа лежит знание того, какой именно элемент необходимо искать.

Если у пациента присутствует определённая симптоматика либо иные исследования указывают на заболевание, назначается серологический анализ.

Серологические исследования используют для диагностики следующих инфекций:

• вирус гепатита А, В, С, D, Е;
• сифилис;
• ВИЧ;
• герпес;
• цитомегаловирус;
• краснуха;
• корь;
• паротит;
• Эпштейн-Барр;
• хеликобактер;
• хламидии;
• микоплазмы;
• токсоплазмы;
• лямблии;
• гельминты;
• уреаплазмы;
• парвовирус;
• вирус ветряной оспы;
• вирус клещевого энцефалита;
• вирус Денге;
• коклюш;
• боррелии;
• легионеллы.

Серологические исследования способны выявить любые инфекции в лабораторных условиях, если в наличии есть Аг возбудителя инфекции.

Особенности исследований

При исследовании на бруцеллез проводится контроль сыворотки крови на самозадержку без антигена. Это позволяет повысить достоверность теста. Результат анализа на бруцеллез может быть положительным, отрицательным или невыраженным, то есть вызывающим сомнения. При получении сомнительных результатов, рекомендуется повторный забор крови. Также бруцеллез диагностируется по результатам посева крови, исследования костного мозга и спинно-мозговой жидкости.

Достоинства и недостатки серологии

Диагностика с применением серологических методов широко используется в современной медицине. Особенно актуален этот тест при выявлении вирусных и инфекционных заболеваний. Этот же тип анализов используется при географических скринингах и медицинских обследованиях для предотвращения эпидемиологических вспышек.

Серологические анализы имеют ряд преимуществ.

• Серологический тест любого типа имеет высокую достоверность.
• Анализы на серологию проводятся достаточно быстро. Результат РСК известен уже через сутки, а получить его можно посредством интернета, не выходя из дома. В особых случаях при стационарном лечении тест проводится в течение нескольких часов.
• РСК позволяет контролировать развитие болезни, и отслеживать эффективность проводимого лечения.
• Серологические методы исследования отличаются невысокой стоимостью и доступны пациентам.

Серологические анализы имеют и некоторые недостатки. Для того, чтобы обследование дало максимально достоверную информацию анализ крови следует проводить с учетом времени инкубационного периода болезни.

На достоверность исследования может повлиять человеческий фактор. Если пациент пренебрегает правилами подготовки к исследованию или лаборант допустил ошибку в обработке образца крови, возможно получение ложного или сомнительного результата. Такая ситуация возникает приблизительно в 5% случаев. Как правило, лечащий врач на основании клинических показаний легко вычисляет ошибку РСК.

Серологическое исследование крови современный и надежный способ выявления таких опасных заболеваний как ВИЧ, гепатит, бруцеллез, ЗППП и пр. Этот раздел медицины направлен на изучение плазмы крови человека и ее иммунологических свойств. Серологический метод широко распространен, а стоимость исследований в частных лабораториях сравнительно невысока. Для проведения анализа используется современное оборудование, которое сводит к минимуму влияние человеческого фактора на результаты исследований.

Какие серологические анализы проводятся в «Университетской клинике»

• Микрореакция на сифилис (RPR, микрореакция преципитации, кардиолипиновый тест) – современный вариант реакции Вассермана. В этом случае с помощью специальных реактивов обнаруживаются антитела к веществам, образующимся в ответ на разрушение клеток при сифилисе. Метод называется нетрепонемным, поскольку обнаруживает не самих возбудителей – трепонем, а следы их разрушительного воздействия. Для его проведения берётся кровь из пальца или вены. Результат отображается в крестах, которых может быть от 1 до 4. Чем их больше, тем сильнее заражение.
• ИФА (иммуноферментный анализ) – обнаружение антител с помощью «меченых» антигенов, которые вырабатываются в ответ на присутствие возбудителя. Так определяется большинство инфекций. Методика выявляет не только имеющиеся инфекции, но и те, которые перенес больной. После многих болезней в организме остается иммунитет в виде иммуноглобулинов, которые можно выявить с помощью исследования. По концентрации иммуноглобулинов этот серологический метод позволяет обнаружить болезни, определить время заражения и проследить, как проходит выздоровление:
• Начало болезни характеризуется появлением иммуноглобулинов IgM, которые первыми регистрируются после заражения. Их обнаружение указывает на недавнее инфицирование. IgM могут появляться при обострении вялотекущего инфекционного заболевания. В этом случае параллельно могут обнаруживаться другие виды иммуноглобулинов
• В разгар заболевания выделяются иммуноглобулины IgA, содержание которых падает по мере выздоровления. Не снижающаяся концентрация этих веществ указывает на прогрессирование болезни и возможный её переход в хроническую форму. Если по результатам серологического анализа острая фаза не уходит, нужно изменить метод лечения, иначе возможен переход болезни в хроническую форму.
• В период выздоровления появляются иммуноглобулины IgG. Такие антитела могут сохраняться в организме длительное время, иногда даже пожизненно. Поэтому их появление при исследовании на корь, брюшной тиф и другие болезни, дающие пожизненный иммунитет, вполне нормально.
• Суммарный ИФА – метод, при котором определяется общая концентрация антител к определённой инфекции. Назначается для оценки эффективности противовирусной и противомикробной терапии. При правильном лечении этот показатель должен снижаться.

Основные симптомы сифилиса

Сифилис – это одно из самых древних и распространенных венерических заболеваний. Возбудителем его является бактерия бледная трепонема. Она передается от человека к человеку при тесном контакте. В некоторых случаях возможно бытовое заражение или инфицирование плода внутриутробно. Бледная трепонема проникает через слизистые оболочки или поврежденные кожные покровы.

Попадая в организм, бактерия нарушает целостность стенок сосудов, вызывая их разрушение и формирование тромбов, что становится причиной омертвения тканей. В ближайшие ткани бактерия попадает с лимфой, а в отдаленные органы переносится с током крови.

Симптомов сифилиса много, и они зависят от стадии заболевания.

С момента инфицирования и до появления первых симптомов может пройти от 10 до 90 дней. Затем в месте проникновения бледной трепонемы через кожные покровы или слизистые оболочки формируется твердый шанкр. Вначале он представляет собой красное пятно, которое постепенно превращается в безболезненную язву с плотными краями. При трении из нее выделяется жидкость. Может наблюдаться воспалительный процесс в региональном лимфатическом узле. В этот период заболевания больной очень заразен. Через некоторое время язва закрывается.

На второй стадии, через 6–12 недель после появления шанкра, появляются и другие симптомы, такие как увеличение групп лифоузлов по телу, слабость, тошнота, головокружение, цефалгия, боль в костях и мышцах. Кожные покровы покрываются мелкой розовой сыпью. Сифилитический дерматит может затрагивать любой участок кожи или слизистых оболочек, но чаще всего проявляется на стопах и ладонях. Другим признаком заболевания могут быть широкие кондиломы, располагающиеся в области половых органов или кожных складок. Также бледная трепонема действует и на другие органы: могут поражаться глаза, суставы, сердце, печень или оболочки мозга.

Результаты анализа считаются действительными на протяжении двух месяцев, затем, при необходимости, тест нужно пересдать.

Поздний сифилис развивается спустя годы после заражения. В этом случае происходит поражение костей и внутренних органов. В толще кожи и стенках органов могут появляться мягкие образования из омертвевшей ткани – гуммы. Также сифилис может поражать нервную систему человека.

Лечение заболевания проводят с помощью антибиотиков. Чаще всего назначаются препараты из группы пенициллинов или макролидов. Продолжительность терапии, дозировку препаратов и схему приема назначает врач после очной консультации. Длительность лечения может составлять от нескольких дней (на начальной стадии заболевания) до года.

Сифилис – это очень серьезное заболевание, которое может оказывать негативное воздействие на все органы. Своевременная диагностика в виде анализа на RW позволяет быстро начать лечение и избежать тяжелых последствий.

Методы проведения серологического исследования

При попадании в организм чужеродных антигенов начинается активная выработка к ним антител. Антигены и антитела взаимодействуют с протеканием различных процессов — агглютинация, преципитация. Именно эти процессы и регистрируются при серологическом исследовании крови.

Реакции “антиген-антитело” регистрируют с помощью химических и физических методов. Их достаточно много, но часть из них уже устарела, и практически не применяется.

• Реакция агглютинации, РА. Проба уже практически нигде не применяется.
• Реакция непрямой гемагглютинации, РНГА. Сложный метод, определяет вирусные и бактериальные инфекции.
• Реакция латекс-агглютинации, РЛА. Используется как экспресс-метод диагностики вирусных и бактериальных инфекций.
• Реакция преципитации в агаре. Используют для оценки степени токсичности бактерий, чаще всего при дифтерии.
• Иммуноэлектрофорез — разделение антигенов на гелевой основе. Используется при диагностике ВИЧ-инфекции.
• Реакция связывания комплемента, РСК. Сложный двухэтапный метод.
• Реакция нейтрализации, РН. Определяет наличие вирусных антител, тип ботулотоксина.

Чувствительность этих методик составляет 70-80%. Их применение постепенно сокращается благодаря появлению новых, более эффективных способов. Следующие два метода относятся к иммуносерологии. Здесь используются химические или физические метки, которые обозначают комплексы “антиген-антитело”.

Иммунофлюоресцентный метод

Иммунофлюоресцентный метод исследования основан на способности микробиологических объектов светиться под ультрафиолетовой лампой. Проба применяется как метод экспресс-диагностики. Сыворотку сначала окрашивают специальным флюоресцентным красителем, а затем помещают ее под микроскоп. Если в ней есть комплексы антиген-антитело, они будут светиться.

Иммуноферментный анализ

Иммуноферментный анализ, ИФА, выявляет антитела в сыворотке или антигены в любой биологической жидкости, полученной от больного. Метод наиболее распространенный, обладает высокой чувствительностью и специфичностью. Позволяет диагностировать любые инфекции.

Особенности проведения серологического анализа крови

Серологический анализ крови проводится для того, чтобы узнать, болеет ли человек определенными инфекционными заболеваниями или он абсолютно здоров. Серологическое исследование делают в лаборатории, после выдается расшифровка. Изучение позволяет выяснить, насколько далеко зашла болезнь, определить стадию заболевания. Определение процедуры и подробное описание этапов анализа освещает википедия.

Анализ крови на антитела показан при большом количестве заболеваний. Речь идет о редких и широко распространенных недугах. Известно, что антитела и антигены способны взаимодействовать. Именно эту особенность врачи и используют, проводя исследование.

Если человек болеет, происходит образование иммунных защитных комплексов. Врач, проводя исследование, добавляет антиген или антитело, а потом наблюдает за реакцией. Именно так становится понятно, какая инфекция присутствует в организме. После этого можно смело начинать лечение.

Серологический анализ крови выполняется следующим образом. Врач берет антиген возбудителя заболевания, добавляет его в сыворотку. В результате манипуляций начинается химическая реакция. Врач производит оценку и выдает результат.

Часто возникает ситуация, при которой события развиваются противоположным образом. Речь идет о том, чтобы определить, какое заболевание у человека. Сделать это можно по имеющимся антигенам. Чтобы их выявить, врач берет антитела и добавляет их в кровь.

Если необходимо узнать, какая группа крови у человека, также сдают материал

Врачи обращают пристальное внимание на то, какова свертываемость крови. Возможно, при исследовании будет выявлено отклонение от нормы, тогда, если не начать лечение, последствия могут быть плачевными. Речь идет не только о тромбозе, у человека возможен инфаркт

Кроме того, повышается вероятность инсульта

Речь идет не только о тромбозе, у человека возможен инфаркт. Кроме того, повышается вероятность инсульта.

Как подготовиться к анализу?

Если вы желаете пройти исследование, то помните о том, что это надо сделать натощак. Анализ крови берут в лабораториях. То, как протекает реакция, врач определяет, используя сыворотку крови. Именно по ней можно понять, как взаимодействуют антигены и антитела. Полученная информация позволяет представить полную картину. Врач, опираясь на результат исследования, назначит наиболее эффективное лечение. Поэтому, если есть возможность, обязательно сдайте материал.

Соблюдайте диету хотя бы в день, предшествующий дню сдачи материала. Не ешьте жирного, сладкое также стоит исключить. Не съедайте слишком много пищи за раз. Алкоголь полностью исключите. Кроме того, не стоит изнурять себя физическими нагрузками. Поскольку стресс может стать причиной искажения результатов, избегайте его перед тем, как сдавать анализ крови.

Какие заболевания определяет анализ?

Если вы думаете, что у вас лямблии, амебиаз, то смело обращайтесь в лабораторию. Исследование материала покажет, если человек болен токсоплазмозом, описторхозом и рядом других заболеваний. Антитела станут сигналом к тому, что стоит начать лечение.

Данное обследование назначают для беременных, при подозрении на сердечно-сосудистую патологию. Варикозное расширение вен, аутоиммунные заболевания — все это показания для проведения исследования.

Кроме того, исследование делают:

• после лечения;
• до и после операции;
• для оценки эффективности лечения.

В урологии и венерологии исследование делают чаще всего.

Что называют нормой?

Если по результатам видно, что антител нет, то это очень хорошо. Инфекция отсутствует. Но такое случается редко, особенно если раньше были все симптомы, указывающие на наличие заболевания. Как правило, серологический анализ часто становится последним подтверждением диагноза.

Обычно анализ крови на антитела делают два раза. Сначала просто определяют, есть ли инфекция. Второй раз анализ на антитела сдают для того, чтобы понять, насколько динамично идет процесс. Если количество связей между антителами и антигенами увеличилось, то идет заражение. Для того чтобы правильно выбрать лечение, врач должен получить больше информации. В такой ситуации проводятся дополнительные химические реакции. Так можно понять, с какой болезнью придется бороться. Кроме того, так определяется стадия болезни.

Результат исследования крови на антитела может быть только повышенным. Нормой является значение на отметке «ноль». Именно по этой причине результат не может быть пониженным.

Иммуноферментный анализ крови

Иммуноферментный анализ

Одним из основных видов серологического исследования является иммуноферментный анализ крови. Он проводится с целью контроля качественного или количественного содержания антигенов и антител в сыворотке крови пациента. Кроме этого данный метод даёт возможность определить количество гормонов, иммунологических комплексов и других биологических веществ в сыворотке.

Как было указано выше, при попадании в органы и ткани антигенов иммунная система блокирует их воздействие на организм с помощью собственных специальных белков – антител или иммуноглобулинов. Под их воздействием происходит образование комплекса антиген – антитело.

Основным биологическим материалом этого лабораторного метода является кровь пациента, хотя исследования спинномозговой жидкости, околоплодных вод, лёгочного пунктата тоже представляют большую ценность в диагностике и лечении многих заболеваний.

Иммуноферментный анализ крови как составляющая серологического анализа основной упор делает на исследование иммунных молекул крови или иммуноглобулинов. Их специфическая особенность обнаруживать и уничтожать определённые возбудители инфекционных болезней, кооперируясь с конкретным антигеном, широко используется для проведения данного исследования.

Из известных в медицинском мире пяти типов иммуноглобулинов широкий клинический эффект получил контроль за наличием в сыворотке крови иммуноглобулинов A, M, и G. Особенно важен иммуноглобулин A, который за счёт своего присутствия на поверхности слизистых оболочек препятствует проникновению чужеродного агента в организм

Важно и то, что возможность определения типа иммуноглобулина при этом исследовании позволяет не только ставить правильный диагноз, но и прогнозировать течение болезни с большим процентом вероятности

Сфера применения

Данное исследование используют в различных отраслях медицины. С помощью этой реакции выявляют специфические клетки и антитела, вырабатываемые организмом для того, чтобы бороться с инфекциями и вирусами.

Кроме этого, с помощью серологического метода определяется группа крови человека.

Подобное серологическое исследование анализа крови используют в гинекологии для диагностики болезней, передаваемых половым путем. Практикуется такой метод и для комплексных обследований беременных женщин (выявление токсоплазмоза, ВИЧ, сифилиса и т. д.). Прохождение этого теста является обязательным при постановке на учет в женской консультации.

У детей серологическая реакция используется для подтверждения диагноза так называемых «детских» заболеваний (ветрянки, кори, краснухи и т. д.) в том случае, если симптоматика не имеет выраженных проявлений и невозможно выявить болезнь, анализируя клинические показания.

Когда и как проводится?

Серология – научно-исследовательская деятельность, изучает плазму человеческой крови и ее иммунобиологические качества.

В сфере медицины серологией именуют определенный раздел иммунологии, где все внимание уделяется исследованию реакции антитела и антигена в плазме крови пациента. Фото:

Фото:

При этом серологическую реакцию разделяют по принципу действия на два вида:

1. прямое взаимодействие (двухкомпонентная) – предполагается реакция агглютинации; пассивная гемагглютинация и преципитация;
2. косвенная (трехкомпонентная) – предполагается РТГА (реакция гемагглютинации), основывается на подавлении антигенов антителами; реакция нейтрализации – способность антител связывать микровозбудителя инфекции.

Как уже упоминалось выше, серологический анализ крови дает возможность диагностировать вирусно-инфекционные заболевания и определять стадию текущего процесса воспаления, позволяет оценить степень взаимного действия антител плазмы крови и антигена.

Данный метод исследования применяется в следующих случаях:

• при необходимости установить число антител, которые воздействуют на провокатора заболевания. В ходе проведения анализа в плазму крови добавляют известный патогенный агент, затем оценивают результат реакции;
• обратное действие – развитие инфекции обнаруживают путем добавления в плазму антител, за счет чего удается выявить находящие в ней антигены и их соответствие конкретному патогенному микроорганизму;
• при необходимости установить группу крови.

Серологический способ обследования крови является незаменимым при подозрении на развитие инфекции в половых путях, при выявлении разного типа венерических заболеваний.

Результат выполненного анализа позволяет получить информацию о наличии в крови антител к определенной группе патогенных микроорганизмов.

Это заболевания печени, герпес, краснуха, вирус, поражающий клетки иммунной системы человека. В зависимости от результатов проведенного анализа лечащий врач делает заключение и назначает пациенту либо дополнительные исследования, либо курс лечебной терапии.

Кровь для проведения серологического обследования берется из локтевой вены пациента. Специальной подготовки со стороны пациента процедура не требует, разве что сдать анализ необходимо будет натощак.

За сутки до сдачи анализа из рациона пациента исключают фрукты и овощи, обладающие окрашивающим эффектом.

Повторное серологическое обследование крови может понадобиться при необходимости подтвердить результаты исследования.

Общие сведения

Иммуноглобулин М вырабатывается только в начальной стадии заболевания – в этот момент концентрация IgM в сыворотке крови стремительно растет. По истечении 5 суток (период полураспада антител М) синтезируются иммуноглобулины класса G. Это, своего рода, «тяжелая артиллерия» организма, призванная окончательно ликвидировать патологический очаг.

Однако IgМ являются незаменимым участником процесса защиты организма в случае острого инфицирования. Именно они быстрее всех остальных антител выбрасываются в кровяное русло и достигают патогенных клеток, тем самым, обеспечивают гуморальный (первичный) иммунитет.

Функции иммуноглобулина М

• Склеивание и выведение в осадок патогенных микроорганизмов;
• Активизация процесса фагоцитоза (поглощение/поедание иммунными клетками чужеродных агентов).

Подготовка к исследованию

Чаще биологическим материалом служит кровь, реже слюна, кал, моча, срезы тканей, альвеолярные смывы, спинномозговая, амниотическая жидкости. Серологические исследования включают в себя множество методов выявления возбудителей, от этого зависят определенные правила подготовки. Общие рекомендации перед серологическими тестами:

• последний прием пищи за 9-12 часов;
• за 24 часа ограничить употребление жирной, жареной, соленой, острой пищи, алкогольных напитков;
• в день сдачи крови нельзя есть, разрешено пить обычную негазированную воду;
• по возможности не курить за 10 часов до сдачи;
• прекратить прием любых лекарственных препаратов, в том числе витаминов. Если медикаменты назначены на постоянной основе и прекратить прием нельзя, предупредить врача;
• за 24 часа избегать стресса, исключить физические нагрузки.

Желательно, чтобы перед сдачей человек находился в спокойном состоянии, так как при любых эмоциональных проявлениях в кровь выделяются гормональные вещества, белки (кортизол, адреналин, норадреналин и др.). Если назначены инструментальные методы диагностики, то в первую очередь сдают кровь, чтобы последующие обследования не повлияли на результат анализа.

Методы проведения серологического исследования.

В серологии может применяться большое число методов

Все методики определения комплексов антиген-антитело (Аг-Ат) основываются на использовании известного Аг либо Ат в поиске неизвестного. Если необходимо обнаружить Аг, необходимы диагностические иммунные сыворотки с содержанием специфических Ат. Если целью СИ является выявление Ат, используются диагностикумы — взвеси, содержащие определённые Аг.

Серологические анализы могут отражать качественный либо количественный результат. При качественном исследовании итог может быть отрицательный или положительный, то есть искомый элемент либо обнаружен, либо нет. Количественный итог выражается в виде числового значения либо знаками «+» (обычно от одного до четырёх).

Непрямая гемагглютинация — один из методов диагностики

Методы серологических исследований:

• Агглютинация. Связывание Ат с Аг с последующим формированием хлопьев либо осадка. Применяются прямые, непрямые, развёрнутые, ориентировочные реакции, позволяющие выявить антитела в сыворотке.
• Гемагглютинация. Используются эритроциты с адсорбированными на них Аг либо Ат, которые склеиваются с соответствующими Ат и Аг. Образуемые комплексы выпадают в виде фестонного осадка.
• Преципитация. Образование комплекса Аг-Ат с последующим осаждением в виде помутнения, именуемого преципитатом.
• Коагглютинация. Выявление Аг при помощи Ат, адсорбированных на белке клеток стафилококка.
• Торможение гемагглютинации. Ат иммунной сыворотки подавляют вирусные Аг, в итоге вирусы теряют способность склеиваться с эритроцитами.
• Непрямая реакция Кумбса. Определяются Ат к поверхностным Аг эритроцитов.
• Кольцепреципитация. Проводится на основе иммунной сыворотки с наслоением растворимого Аг.
• Двойная радиальная иммунодиффузия. Реакция основана на диффундировании компонентов антисыворотки и Аг в лунках агара либо агарозы.
• Реакция связывания комплемента. Связь Аг и Ат сопровождается адсорбцией комплемента, в качестве индикатора используются эритроциты барана и Ат к ним в составе гемолитической сыворотки.
• Нейтрализация. Основана на нейтрализации вирусного агента антителами.
• Реакции, основанные на маркировании Ат и Аг флуоресцентным либо ферментным составом — иммунофлюорисцентный (РИФ) и иммуноферментный (ИФА) методы.

Методы серологических исследований

Способов проведения диагностики множество, как и заболеваний, которые они выявляют. Наиболее значимые:

1. Агглютинация.
2. Преципитация
3. Гемагглютинация.
4. Торможение гемагглютинации.
5. Непрямая реакция Кумбса.
6. Коагглютинация.
7. Преципитация.
8. Двойная радиальная иммунодиффузия.
9. Реакция связывания комплемента (РСК).
10. Иммунофлюоресценция (РИФ).
11. Иммуноферментный метод (ИФА).
12. Нейтрализация.

Чаще всего в лабораториях применяют ИФА, РИФ, РСК, реакции агглютинации.

Иммунофлюоресцентный метод (РИФ)

Для проведения исследования необходим биологический материал пациента, люминесцирующая жидкость. Второй компонент содержит антитела к предполагаемому возбудителю заболевания, которые помечены флуоресцеинизотиоционатом.

Виды РИФ:

1. Прямой – материал пациента смешивают с мечеными антителами, если это срез ткани, обрабатывают его поверхность. Если возбудитель присутствует, образуется светящийся комплекс.
2. Непрямой – проводят в 2 этапа. На первом в сыворотку или другой материал добавляют немеченые (первые) антитела. На втором вводят меченые (вторые) антитела против первых.

Полученные комплексы исследуют под люминесцентным, оптическим микроскопом ручным способом или автоматическим с помощью микрочипового цитометра. Из-за флуоресцентного вещества комплексы при затемнении излучают зеленое свечение, яркость которого отмечают плюсами от 1 до 4. Чем меньше плюсов, тем меньше комплексов с возбудителем заболевания.

Иммуноферментный метод

Как и РИФ, основан на маркировке чужеродного материала или белковых иммунных компонентов. В качестве маркировочного вещества выступают различные ферменты, которые имеют высокую специфичность, умеренную каталитическую активность, стабильность при образовании комплексов. Методы ИФА: гомогенные, гетерогенные. При первых все реакции происходят в жидком растворе. При вторых реакции проводят при участии твердого носителя.

Суть ИФА заключается в образовании комплексов иммунных белков человека с чужеродными антигенами сначала в жидком растворе, затем на твердой фазе. Под ней подразумевают прикрепление антигенов, антител к стенкам лунок полистиролового микропланшета. То есть после смешивания материала пациента с антителами против возбудителя смесь переносят на поверхность с лунками, куда прикрепляются антитела, антигены. Дальше изучают состав материала.

Реакция связывания комплимента

Для исследования необходимы: кровь или другой материал пациента, сыворотка с антителами, комплимент. Сначала смешивают кровь с сывороткой – образуется комплекс. После добавляют комплимент, который связывается с комплексом. Если связи между антиген-антитело не образуется, то комплемент остается в свободном, несвязанном состоянии. Чтобы определить его состояние в исследуемой жидкости, добавляют гемолитическую смесь (эритроциты барана с гемолитической сывороткой). Если комплемент свободен, он соединяется с гемолитической смесью – реакция отрицательная, возбудитель не обнаружен.

Реакции, связанные с агглютинацией

Самые простые серологические реакции – с применением антибактериальной сыворотки. Исследуемую кровь пациента смешивают при комнатной температуре с различными сыворотками определенной концентрации. Результат оценивают по концентрации сыворотки, при которой произошла агглютинация. С помощью агглютинации определяют группу крови, резус-факторы.

Важно! 

Распространенным методом серологической диагностики являются реакции, основанные на феномене преципитации: иммуноэлектрофорез, иммунодиффузия и др.

Расшифровка результатов исследования

После забора крови и проведения исследования, специалист сначала выявляет в организме человека наличие инфекционного или вирусного заболевания, а затем, исходя из колличества антител, определяет степень развития заболевания. Если проведен серологический анализ крови, расшифровка которого показывает нулевое содержание антител, значит, организм не инфицирован. Но если содержание антител немного превышено, вероятнее всего, вирусное или инфекционное заболевание имеет место быть. Но помним, что необходимо проведение повторного анализа.

Серологические маркеры	Этиология хронических вирусных гепатитов
	Фаза репликации	Фаза интеграции	B и D	D	C
HBsAg	+	+	+	+	—
HBeAg	+	—	+	—	—
Anti-HBclgM	+/-	—	+/-	—	—
Anti-HBc (суммарные)	+	+	+	+	—