Статьи

Микроскопическое исследование мазков у женщин

Оно является ключевым методом анализа при диагностике инфекций, передающихся половым путем, и оппортунистических заболеваний (вызываемых условно-патогенными бактериями).

Микроскопический анализ позволяет оценить качественный и количественный состав микрофлоры, проверить правильность взятия пробы. К примеру, наличие вагинального эпителия в мазке, взятом из цервикального канала, указывает на нарушение правил отбора биологической пробы.

Стоит сказать, что микробиологическое обследование в данном случае вообще сопровождается определенными проблемами. Они связаны с тем, что в нижних отделах полового тракта в норме присутствует разнообразная микрофлора, изменяющаяся в различные возрастные периоды. Для повышения эффективности исследования и были разработаны унифицированные правила.

Регламентирующие документы

Чтобы анализ соответствовал требованиям государства, его регламентируют законы, указанные в таблице:

Объекты санитарно-микробиологического исследования на стерильность. Методы отбора проб и их исследование. Интерпретация результатов санитарно-микробиологических исследований на стерильность

Про­бы отбирают
методом смыва стерильным ватным тампоном,
по­мещенным в пробирки с пептонной
водой. Перед взятием пробы тампо­ны
увлажняют. Для проведения смывов с рук
увлажненным ват­ным тампоном протирают
руки обследуемого. Перед исследованием
смывную жидкость с тампоном или салфеткой
встряхивают в течение 10 мин для десорбции
микроорганизмов и далее смывную жидкость
ис­пользуют для посевов.

Методика
исследования.Определение
БГКП.

Определение
Staphylococcusaureus.
1
мл смывной жидкости засе­вают в
пробирку солевого бульона, инкубируют.
При наличии роста высевают на желточно
– солевой агар для получения изолированных
колоний.

Требования
к микробиологической чистоте: присутствие
БГКП, синегнойной палочки, протеев,
стафилококка в смывах не
допус­кается.

Посев на плотные среды

Микроскопические методы микробиологического исследования позволяют выявить большое количество микроорганизмов. Но, несмотря на это, метод посева считается наиболее распространенным в практике. Суть его состоит в высеве объема препарата (почвенной суспензии) в чашке Петри на плотную среду.

Этот метод микробиологического исследования позволяет учитывать не только количество, но и групповой, а в ряде случаев и видовой состав микроскопической флоры. Подсчет числа колоний производится, как правило, со дна чашки Петри в проходящем свете. На подсчитанном участке ставится точка маркером либо чернилами.

Справочная информация

ДокументыЗаконыИзвещенияУтверждения документовДоговораЗапросы предложенийТехнические заданияПланы развитияДокументоведениеАналитикаМероприятияКонкурсыИтогиАдминистрации городовПриказыКонтрактыВыполнение работПротоколы рассмотрения заявокАукционыПроектыПротоколыБюджетные организацииМуниципалитетыРайоныОбразованияПрограммыОтчетыпо упоминаниямДокументная базаЦенные бумагиПоложенияФинансовые документыПостановленияРубрикатор по темамФинансыгорода Российской Федерациирегионыпо точным датамРегламентыТерминыНаучная терминологияФинансоваяЭкономическаяВремяДаты2015 год2016 годДокументы в финансовой сферев инвестиционной

Санитарно-показательные микроорганизмы

Присутствие или отсутствие санитарно–показательных микроорганизмов указывает на загрязнение или стерильность объекта микробиологического исследования, который считается чистым, если в его составе или на его поверхности не обнаружено следующих микробов:

• кишечной палочки;
• гемолитических стрептококков;
• гемолитических стафилококков.

В процессе микробиологического контроля продуктов ведется учет вышеперечисленных патогенных организмов, однако их число в различных местах обитания существенно разнится. Связано это с тем, что патогенные микроорганизмы предпочитают обитать в среде, подверженной эпидемической вспышке. Поэтому возможное загрязнение выявляют с помощью индикаторных микроорганизмов, которые соответствуют следующим критериям:

• наличие общей среды обитания и метода распространения с патогенными микробами;
• высокая жизнеспособность в сравнении с патогенными микроорганизмами;
• простой способ определения.

В результате многолетних исследований в различных странах в качестве индикатора загрязнения воды, продуктов питания, оборудования и персонала используют бактерии группы кишечной палочки. Чистоту воздуха определяют с помощью таких индикаторных микроорганизмов, как гемолитические стафилококки. Для оценки загрязнения почвы применяют  грамположительные споровые палочки – Clostridium perfringens и Clostridium sporogenes.

Иногда выделить патогенные микроорганизмы становится сложно, что обусловлено рядом причин:

• доля патогенов во всей микрофлоре продуктов ничтожно мала (1/30000 часть);
• быстрая адаптация патологических организмов к условиям окружающей среды;
• патогены способны размножаться только на специальных культурах тканей и клеток.

Чтобы микробиологическое исследование продуктов было успешным и результативным, необходимо проводить его с использованием качественного и надежного оборудования, которое можно приобрести в нашей компании.

Какие бактерии выявляют?

Для каждого вида вод определяют нормативные показатели по содержанию микроорганизмов. Количество варьируется в большую или меньшую степень, но незначительно.

Определяемые патогенные микроорганизмы для микробиологического анализа отличаются для каждого источника.

Данные представлены в таблице:

Если степень загрязнения превышает эти данные, источник не пригоден для использования в любой области человеческой деятельности.

Что делать после получения результата?

Если полученные данные благоприятные, не выявлено обильного роста микрофлоры, вода пригодна для использования.

Тестирование повторяют каждые полгода, чтобы следить за качеством воды, особенно если она питьевая. В воде может незначительно повышаться количество инфекционных агентов.

Если их число не превышает верхнюю границу нормы, воду кипятят или пропускают через собственную систему очистки, после чего употребляют. Это снижает вероятность заражения:

1. человека,
2. почвы,
3. животных.

При значительном превышении уровня патогенной флоры обращаются в коммунальные службы, если исследовалась питьевая вода из-под крана.

Можно подать жалобу в санэпидстанцию, которая предпримет меры для улучшения фильтрационной системы. Если это колодезная вода, человек должен решить проблему самостоятельно (поставить фильтры).

Для чего необходимо бактериологическое исследование?

Бактериологические исследования позволяют идентифицировать возбудителя болезни и установить его степень чувствительности к определенным антибиотикам для выявления эффективности лечения. Данный метод исследования широко применяется в медицинской практике инфекционистами, отоларингологами, гинекологами, урологами, онкологами, хирургами и другими специалистами. Он назначается при любых воспалительных заболеваниях в организме и при подозрении на развитие сепсиса.

Как правильно осуществить забор материала?

Материалом для бактериологических исследований может служить кровь, ликвор, мокрота, испражнения, моча, желчь, спинномозговая жидкость, грудное молоко, выделения из ротовой полости, половых органов, зева, носоглотки и ран.

Главное требование забора – стерильность посуды и инструментов. При несоблюдении этого требования результаты окажутся совершенно неправильными, так как произойдет обсеменение собранного материала.
Брать биологический материал для исследований следует до начала приема антибиотиков. В противном случае результат существенно исказится.
Полученный материал необходимо немедленно доставить в лабораторию, чтобы не допустить его гибели.
В нашей лаборатории забор биологических жидкостей выполняется в абсолютно стерильных условиях специально обученными медсестрами в соответствии со всеми правилами, что гарантирует качество собранного материала и достоверность полученных результатов.

Как проходит исследование?

Бактериологические исследования включают несколько этапов, на проведение которых требуется от 3 до 10 дней.
Чтобы выделить чистую культуру возбудителя, осуществляют посев полученного материала на специальную питательную среду, на которой способен жить только определенный вид микроорганизмов. Например, для идентификации дифтерийной палочки применяют теллуритовую среду, а для обнаружения кишечной палочки – среду Эндо. Если требуется выделить условно-патогенные микроорганизмы, то пользуются универсальными питательными средами, чаще всего кровяным агаром.

Питательную среду помещают в термостат, чтобы создать оптимальные условия для роста и размножения микроорганизмов.
По истечении определенного времени производят контрольный осмотр полученных колоний

Если необходимо, используют специальные красители, позволяющие обнаружить определенные штаммы бактерий. 
При контрольном осмотре обращают внимание на цвет, форму и плотность колонии, ее способность к разложению некоторых органических и неорганических соединений. Затем с помощью специальных методов подсчитывают количество микроорганизмов в образце.

Плюсы и минусы бактериологического исследования

Бактериологический посев имеет несколько преимуществ:

• характеризуется высокой специфичностью;
• позволяет проводить исследование любой биологической жидкости;
• дает возможность определить чувствительность патогенного микроорганизма к определенному лекарству и правильно подобрать терапию.

Но есть у этого метода и некоторые недостатки:

• результат можно получить только по происшествии нескольких дней;
• требует высокой квалификации персонала бактериологической лаборатории;
• предъявляет высокие требования к забору материала.  

Результат исследования

Результатом бактериологического исследования является обнаружение возбудителя (или его отсутствие) в собранном материале и выявление его концентрации, что позволяет подобрать результативную терапию и эффективно избавиться от возбудителей.

Последовательность действий и особенности методики

Для проведения бактериологического исследования необходимо выполнить сбор материала и культивировать его на питательных средах с последующей микроскопией полученных штаммов и проверкой чувствительности к антибиотикам.

Сбор материала

Биоматериалом для исследования могут служить кровь, моча, ликвор, мокрота, сперма, кал, мазки из глотки, влагалища, уретры, любые другие ткани и жидкости из области инфекционного процесса. Образцы собирают в асептических условиях, помещают в стерильную посуду и в течение 2-х часов доставляют в лабораторию. При необходимости пробы хранят при пониженных температурах.

Культивирование

Культивирование проводят с применением механических или биологических методов. Механический подход с использованием стандартных искусственных сред – наиболее распространенный. В данном случае для высевания образцов используют жидкие и твердые питательные составы. Наиболее распространенные – агар, мясо-пептонный бульон.

Посев материала производят с помощью специальной петли или пастеровской пипетки, растирая полученный образец по поверхности или вводя его в толщу питательной среды. Выделение бактерий производят из чистых культур, которые получают повторным посевом ранее выращенных колоний на новую среду.

Биологические методы подразумевают использование специальных питательных сред, которые учитывают особенности микроорганизма, в частности, чувствительность к некоторым химическим веществам, в том числе антибиотикам. В некоторых случаях применяют метод заражения лабораторных животных или тканевых культур с отслеживанием патологических изменений. Такой подход актуален при крайне незначительном накоплении микроба в тканях человека – в этом случае его выделение посевом на питательных средах не дает результата.

Микроскопическое исследование

Основной метод бактериологической диагностики – бактериоскопия. Она подразумевает визуальную оценку параметров микроорганизма под микроскопом. Для этого используют фиксированные и нефиксированные препараты.

Нефиксированные препараты позволяют исследовать живые образцы бактерий. Основные методы:

• раздавленная капля – образец придавливают между предметным и покровным стеклами;
• висячая капля – образец помещают в лунку на предметном стекле и герметично накрывают покровным.В качестве среды используют изотонический раствор или расплавленный агар. Методика позволяет наблюдать за живыми микроорганизмами в течение нескольких дней.

Фиксированные препараты используют для окрашивания с подробным изучением морфологических и некоторых биохимических параметров патогенов. Каплю бактериального состава размазывают по предметному стеклу и фиксируют пламенем горелки или специальными химическими составами.

Для определения свойств бактериальных препаратов используют ряд общих и специфических методик:

• микроскопия – определение формы, размеров, окрашивания по Граму;
• биохимические методы – исследование ферментативной способности микроорганизма к расщеплению тех или иных углеводов, аминокислот, метаболитов, в том числе способность к гемолизу, фибринолизу при попадании в кровь живых существ;
• серологические методы идентификации – реакции агглютинации под воздействием специфической сыворотки и другие антигенные свойства;
• биологические методы – заражение лабораторных ждивотных с проверкой патогенности и токсигенности взятых образцов, их устойчивости к антибиотикам.

Только совокупный анализ результатов всех методов диагностики – микроскопических, биохимических, серологических, биологических – дает объективный результат для вынесения точного диагноза.

Седиментация

Этот метод микробиологического исследования в микробиологии считается простейшим. Он основывается на оседании капель и частиц на поверхности агара в открытой чашке Петри под действием силы тяжести. Метод седиментации не позволяет точно определить число бактерий в воздухе. Дело в том, что на открытой чашке уловить мелкие фракции пылевых частиц и бактериальных капель довольно сложно. На поверхности задерживаются преимущественно крупные частицы.

Этот метод не используется при анализе атмосферного воздуха. Этой среде свойственны большие колебания скорости движения воздушных потоков. Седиментация, однако, может использоваться при отсутствии более совершенных приборов или источника электроэнергии.

Определение микробного числа осуществляется по методу Омелянского. В соответствии с ним, за 5 минут на поверхности агара площадью 100 кв. см оседает такое число бактерий, которое присутствует в 10 л воздуха.

Приказ 535 «Об унификации микробиологических методов исследования»

Бактериологический анализ занимает важнейшее место в комплексе клинико-лабораторных мероприятий, направленных на диагностику, профилактику и лечение разнообразных инфекционных заболеваний. Однако исследованием окружающей среды они не ограничиваются.

Особое значение имеет бактериологический анализ биологического материала в лечебных учреждениях. К исследованиям, проводимым в медучреждениях, предъявляются повышенные требования. Целью Приказа «Об унификации микробиологических методов исследования» является совершенствование бактериологического анализа, повышение качества и эффективности микробиологической диагностики.

Сведения о читателях

Острые кишечные инфекции

ОКИ – большая группа этиологически
полиморфных заболеваний, возбудители
которой принадлежат к различным
группам микроорганизмов(бактерии,
простейшие, вирусы, грибы). Все заболевания
объединены в одну группу на основании
эпидемиологического признака – путь
распространения и входные ворота.

Путь распространения – фекально-оральный,
входные ворота – ЖКТ.

Из простейших возбудителями ОКИ являются
различные виды, но наиболее часто
возбудителями заболеваний являются
лямблии, дизентерийная амеба,
криптоспоридии. Наибольшая роль в
возникновении ОКИ в нашем регионе
принадлежит бактериям:

Iместо сем.Enterobacteriaceae

IIместо сем.Vibrionaceae

IIIместо сем.Campylobacteriaceae

IVместо сем.Bacillaceae

Vместо сем.Clostridiaceae
и др.

Вирусы.Основной причиной
гастроэнтеритов у детей первого года
являются ротавирусы, у детей и взрослых
вызывают ОКИ энтеровирусы, чаще всего
71 типа.

сем. Enterobacteriaceae

Это семейство включает многочисленных
представителей, которые объединены в
одно семейство по следующим признакам:

1. Общность происхождения (родоначальником
   является E. coli).

2. Генетическое сродство (для всего
   семейство молярный % ГЦ ДНК имеет близкие
   значения).

3. Все энтеробактерии обладают сходными
   биологическими свойствами. В процессе
   эволюции они дифференцировались на
   патогенные, которые в норме не
   присутствуют, а попав в организм,
   вызывают инфекционный процесс. Вторую
   группу составляют условно-патогенные
   энтеробактерии, которые входят в состав
   нормальной микрофлоры организма
   человека, в основном желудочно-кишечного
   тракта.

4. все энтеробактерии как патогенные,
   так и условно-патогенные, могут вызывать
   кишечные инфекции, а условно-патогенные
   могут вызывать гнойно-воспалительные
   и токсико-септические процессы самой
   различной локализации, вплоть до
   сепсиса.

Биологические свойства

Все энтеробактерии палочкисредней
величины с закругленными концами,
расположенные беспорядочно,аспорогенны,грамотрицательны, капсулообразование
непостоянно. Одни энтеробактерии
подвижны за счет перитрихиально
расположенных жгутиков, другие неподвижны.
По типу получения энергии являютсяфакультативными анаэробами.

Культуральные свойства

Все энтеробактерии нетребовательны к
питательным средам и растут на простых.
На МПА образуют однотипные колонии
средней величины, круглые, гладкие,
выпуклые, бесцветные. На МПБ – равномерное
помутнение.

Биохимические свойства общие для
всего семейства (по этим свойствам
сем.Enterobacteriaceaeотличается от других сходных по
морфологическим свойствам семейств
одной группы по Берджи)

1. Расщепляют глюкозу до кислоты или до
   кислоты и газа;

2. редуцируют нитраты в нитриты;

3. Каталаза +, оксидаза -, OF-тест
   +/+ (окисление и ферментация).

Антигенное строение

Все энтеробактерии имеют О-антиген,
который локализован в клеточной стенке,
К-антиген, который находится либо в
капсуле, либо в субстанции, окружающей
клеточную стенку. Подвижные представители
имеют Н-антиген. Также обнаруживается
аниген фимбрий (пилей, ворсинок) –
Fi-антиген.

Методы и цели микробиологии

К методам исследования любых микроорганизмов относят:

• микроскопия: световая (в том числе фазово-контрастная, темнопольная, флуоресцентная) и электронная;
• культуральный метод (бактериологический, вирусологический);
• биологический метод (заражение лабораторных животных с воспроизведением инфекционного процесса на чувствительных моделях);
• молекулярно-генетический метод (ПЦР, ДНК- и РНК-зонды и др.);
• серологический метод — выявления антигенов микроорганизмов или антител к ним (ИФА).

Цель медицинской микробиологии — изучение структуры и свойств патогенных микробов, взаимоотношения их с организмом человека в определенных условиях природной и социальной среды, совершенствование методов микробиологической диагностики, разработка новых, более эффективных лечебных и профилактических препаратов, решение такой важной проблемы, как ликвидация и предупреждение инфекционных болезней

Воздух

Он считается транзитной средой для микроорганизмов. Основными методами микробиологического исследования воздуха являются седиментация (оседание) и аспирация.

Микрофлора воздушной среды условно разделяется на переменную и постоянную. К первой относятся дрожжи, пигментообразующие кокки, спороносные бациллы, палочки и прочие микроорганизмы, устойчивые к высыханию, воздействию света. Представители переменной микрофлоры, проникая в воздух из привычной для них среды обитания, недолго сохраняют свою жизнеспособность.

В воздухе крупных мегаполисов микроорганизмов намного больше, чем в воздушной среде сельской местности. Над морями, лесами бактерий очень мало. Очищению воздуха способствуют осадки: снег и дождь. В закрытых помещениях микробов намного больше, чем на открытых пространствах. Их количество повышается в зимний период при отсутствии регулярного проветривания.

Диагностика вирусных инфекций

Она осуществляется методами выявления РНК и ДНК-возбудителей. Они базируются преимущественно на определении нуклеотидных последовательностей в патологическом материале. Для этого используются молекулярные зонды. Они представляют собой искусственно полученные нуклеиновые кислоты, комплементарные (дополняющие) вирусным кислотам, меченные радиоактивной меткой или биотином.

Особенность метода состоит в многократном копировании конкретного фрагмента ДНК, включающего в себя несколько сотен (или десятков) нуклеотидных пар. Механизм репликации (копирования) заключается в том, что достраивание может начаться исключительно в определенных блоках. Для их создания используются праймеры (затравки). Они представляют собой синтезированные олигонуклеотиды.

ПЦР-диагностика (полимеразная цепная реакция) проста в исполнении. Этот метод позволяет быстро получить результат при использовании небольшого объема патологического материала. С помощью ПЦР-диагностики выявляются острые, хронические и латентные (скрытые) инфекции.

При чувствительности этот метод считается более предпочтительным. Однако в настоящее время тест-системы недостаточно надежны, поэтому ПЦР-диагностика не может полностью заменить традиционные методики.

Недостатки исследований на бактериальный посев

• Длительное время проведения анализа. Нужно не только выявить возбудителя, но и определить его чувствительность, что занимает много времени. К сожалению, ускорить этот процесс нельзя. Бактерии вырастают в термостате – приборе, поддерживающем нужную температуру, за определённое время. Ускорение приведет к искажению результатов.
• Не все представители микрофлоры высеваются в питательную среду – существуют виды, которые невозможно вырастить в лабораторных условиях.
• Возможность ложноотрицательного результата, который возникает, если пациент перед сдачей материала принимал антибиотики или использовал местные антибактериальные препараты.

Бактериоскопический метод исследования

Клетки микроорганизмов
можно изучать как в живом состоянии
(метод раздавленной капли и метод висячей
капли), так и в фиксированном и окрашенном
состоянии.

Метод раздавленной
капли. На
поверхность обезжиренного предметного
стекла наносят каплю исследуемого
материала или суспензию бактерий и
покрывают ее покровным стеклом. Капля
не должна выходить за края покровного
стекла. Микроскопируют препарат с
объективом х40. Метод раздавленной капли
удобен для исследования подвижности
бактериальных клеток, а так­же для
изучения крупных микроорганизмов —
плесневых грибов, дрожжей.

Метод висячей
капли.
Препарат готовят на покровном стекле,
в центр которого наносят каплю
бактериальной суспензии. Затем специальное
предметное стекло с лункой, края которой
предварительно смазаны вазелином,
прижимают к покровному стеклу так, чтобы
капля находилась в центре лунки. Препарат
переворачивают покровным стеклом вверх.
В правильно приготовленном препарате
капля должна свободно висеть над лункой,
не касаясь ее дна или краев. Для микроскопии
используют вначале сухой объектив х8,
под увеличением которого находят края
капли, а затем устанавливают объектив
х40 и исследуют препарат.

Приготовление
фиксированных препаратов.
Для приготовления препарата на
обезжиренное предметное стекло наносят
каплю воды или изотонического раствора
хлорида натрия, в которую бактериологической
петлей вносят исследуемый материал и
круговыми движениями петли распределяют
его таким образом, чтобы получить тонкий
и равномерный мазок диаметром 1-1,5 см.
Если исследуют жидкий материал, то его
наносят на предметное стекло непосредственно
петлей и готовят мазок. Мазки высушивают
на воздухе.

Для фиксации
используют физические и химические
методы. Для фиксации мазка физическим
методом предметное стекло медленно
проводят 3 раза через пламя горелки.
Мазки крови, мазки-отпечатки органов и
тканей фиксируют химическим методом
путем погружения их на 5-20 минут в
метиловый или этиловый спирт, смесь
Никифорова и другие фиксирующие жидкости.

Для окрашивания
микробов используют простые и сложные
методы. При простом методе фиксированный
мазок окрашивают каким-либо одним
красителем, например, водным раствором
фуксина (1-2 минуты) или метиленовым синим
(3-5 минут), промывают водой, высушивают
и микроскопируют. Сложные методы
окрашивания включают последовательное
использование нескольких красителей.
Это позволяет выявить определенные
структуры клеток и дифференцировать
одни виды микроорганизмов от других.

Бизнес и финансы

БанкиБогатство и благосостояниеКоррупция(Преступность)МаркетингМенеджментИнвестицииЦенные бумагиУправлениеОткрытые акционерные обществаПроектыДокументыЦенные бумаги — контрольЦенные бумаги — оценкиОблигацииДолгиВалютаНедвижимость(Аренда)ПрофессииРаботаТорговляУслугиФинансыСтрахованиеБюджетФинансовые услугиКредитыКомпанииГосударственные предприятияЭкономикаМакроэкономикаМикроэкономикаНалогиАудитМеталлургияНефтьСельское хозяйствоЭнергетикаАрхитектураИнтерьерПолы и перекрытияПроцесс строительстваСтроительные материалыТеплоизоляцияЭкстерьерОрганизация и управление производством